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研究生:黃獻龍
研究生(外文):HUANG, XIAN-LING
論文名稱:愛德華氏菌溶血基因A與溶血基因B之選殖
論文名稱(外文):Cloning of two haemolytic gene determinant bly A and hly B from fish pathogenic strain edwardsiella tarda
指導教授:陳昭德陳昭德引用關係
指導教授(外文):CHEN, ZHAO-DE
學位類別:碩士
校院名稱:國立海洋大學
系所名稱:水產養殖研究所
學門:農業科學學門
學類:漁業學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1992
畢業學年度:80
語文別:中文
論文頁數:93
中文關鍵詞:愛德華氏菌溶血基因A溶血基因B選殖
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三、 材料與方法
Ⅰ、 菌株活化與溶血試驗
(一) 菌株活化與保存
(二) 溶血試驗
Ⅱ、 染色體去氧核醣核甘酸之萃取
(一) 例行性細菌培養
(二) 染色體去氧核醣核甘酸之萃取
Ⅲ、 質體去氧核醣核甘酸之萃取
(一) 細菌之生長與培養
(二) 質體數目之倍數增殖
(三) 質體去氧核醣核甘酸之萃取
Ⅳ、 南方點墨法雜交試驗
(一) 去氧核醣核甘酸之剪切
(二) 洋菜膠之製備
(三) 分離核甘酸片段
(四) 移轉洋菜膠上之核甘酸片段至Nylon membrane
(五) 核甘酸標幟
(六) 雜交試驗
Ⅴ、 溶血基因選殖
(一) 去氧核醣核甘酸之剪切
(二) 去氧核醣核甘酸之接合
(三) 具轉形能力細胞之製備
(四) 電破法基因轉殖
(五) 重組質體篩選
(六) 溶血基因篩選
(七) 小量質體萃取
(八) 質體純化
(九) 限制輿圖
Ⅵ、 溶血活性力價之測定
(一) 細菌培養與前處理
(二) 紅血球之前處理
(三) 紅血球溶解試驗
(四) ET16菌株溶血毒素活性穩定性之測定
(五) ET16菌株溶血毒素熱安定性之測定
(六) ET16泬血毒素對羊血與魚血溶解能力之比較
Ⅶ、溶血毒素分子量之測定
(一) 細菌培養與處理
(二) 檢體之前處理
(三) 聚丙醯胺膠之製備
(四) 膠電泳定分子量與溶血毒素活化
Ⅷ、 核甘酸定序聚丙醯胺膠之製備
(一) 玻璃板之前處理
(二) 聚丙醯胺膠之配製
Ⅸ、 溶血基因定序與膠電泳
(一) 變性與中和作用
(二) 模版與引子複合
(三) 標幟反應
(四) 終止反應
(五) 變性膠電泳
(六) 電泳膠之處理
(七) X 光片沖洗與判讀
四、 結果
Ⅰ、 菌株溶血表現型之分佈
Ⅱ、 Aerolysin 探針雜交檢測溶血基因結構之差異
Ⅲ、 溶血基因hlyA與hlyB之分離
Ⅳ、 HlyA與HlyB之溶血活性測定
Ⅴ、 溶血毒素蛋白之分子量
五、 討論
六、 謝辭
七、 參考文獻
八、 附圖
九、 附表
十、 作者簡歷

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