高等植物澱粉磷解酵催化澱粉的分解(釋出G-1-P )與合成(釋出PI)反應,但是在 什麼情況下進行分解、什麼情況下進行合成,則仍不清楚,因此最根本的方法便是直 接由植物基因組澱粉磷解酵基因著手,研究該基因在植物體內如表現。本實驗先用馬 鈴薯幼嫩塊莖L 型澱粉磷解酵CDNA的0.7KB HIND III片段作為探針,由菸草基因組的 基因庫中,篩選出8.1KB 的BAMHI 片段。經過選殖、次選殖及核酸定序,找到可能包 含pro-moter 與轉錄起始部位的1.4kb BamHI. PstI 片段。在該片段的後面接上GUS 報導基因(在PBI1.1.1中),經瘤農桿菌送入菸草,已得到健康的轉殖植物。由南方 氏墨點法及MUG 染色,知道該片段的確含有promoter,並確實併入菸草的基因組中, 在葉與根部表現。另外從8.1kb 的BamHI 片段,反向接在CAMV35S promoter(在 pMON530 中)後面,經瘤農桿菌送入菸草。後者已得到健康的轉殖植物,目前移至溫 室種植於盆土;前者則因小苗黃化,重新處理一次,現已移至出生長室種植於根基旺 培養土。因為8.1KB BAMH I片段與馬鈴薯CDNA相較,下游部分還少了大約400 個鹽基 對,所以仍繼續篩選其他基因庫,以找出完整基因。
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