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研究生:郭榮烈
研究生(外文):GUO, RONG-LIE
論文名稱:黃鰭鯛生長激素在酵母菌上之表現
論文名稱(外文):Expression of yellowfin porgy growth hormone cDNA in a yeast, saccharomyces cerevisiae
指導教授:蔡懷楨蔡懷楨引用關係
指導教授(外文):FAN, CHENG-YUAN
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:漁業科學研究所
學門:農業科學學門
學類:漁業學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1992
畢業學年度:80
語文別:英文
論文頁數:44
中文關鍵詞:黃鰭鯛酵母菌
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本實驗將黃鰭鯛生長激素cDNA接在 α-因子領導序列的啟動子之後,共同接在2u質
體上,完成後此載體先用限制 剪切分析確定之,將其轉形到酵母菌中,由抗藥性
的標誌確定轉形成功後,把轉形株培養在選擇性培養基中,培養三天然後抽取蛋白
質產物,為了解蛋白質產物是來自細胞之那一部分,將分析樣本分成四部分,1.培
養酵母菌後之培養液,2.細胞抽出液,3.triton處理細胞碎片,4.urea處理細胞碎
片,把這些樣本以sds-page蛋白質電泳分析,結果培養酵母菌後之培養液在22kDa
附近以銀染顯現一蛋白質條紋比控制組(只含 pMA56/α) 多出,其蛋白質經免疫化
學染色亦為正反應但產量低。此載體穩定性低在第三天三十代時只剩10% 的穩定度
。為改善生產量曾嘗試各種培養方法,在固體培養方面有更好的產量。此蛋白質只
在酵母菌培養液中測得,故大多分泌到體外。另外因其產量不穩定猜測生產過程生
長激素易被蛋白質分解 ,目前有幾種氨基酸加在培養基中會促進酵母菌的生長,
但是否有抑制效果需進一步分析。
為了做比較又構築一非分泌性載體,把α-因子領導序列的啟動子換成 qlyceralde
hyde-3-phosphate hydrogenase (GAP) promotor, 將該載體轉形到酵母菌,以同
樣方法培養,並分析蛋白產物亦被証實在細胞抽出液的樣本中用電泳分析在22kDa
上有一條紋比控制組多出,且免疫化學染色亦為正反應。樣本來自細胞抽出的部分
,故不會分泌到體外,此結果並可顯示該生長激素在酵母菌中是為水溶性。
#9200133
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