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研究生:鄧琪成
研究生(外文):DENG, QI-CHENG
論文名稱:多性瘤病毒主要外套蛋白質VP1的結構與光譜分析
論文名稱(外文):Spectroscopic studies on the structure of polyoma virus major capsid protein VP1
指導教授:楊雅雯楊雅雯引用關係
指導教授(外文):YANG, YA-WEN
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:藥學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:藥學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1992
畢業學年度:80
語文別:中文
論文頁數:72
中文關鍵詞:病毒蛋白質
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Polyoma 病毒是含雙股DNA病毒中構造最簡單的種類之一,它的主要外套蛋白質VP1
,已被選殖在E. coli 中,並被以pentamers的形式純化出來。VP1 在各種情況下,
被以電子顯微鏡觀察到可以自行形成類似病毒蛋白衣的結構。本實驗的主要目的在
於以光譜的方法研究VP1 的結構與其穩定性。
在本實驗中,VP1 蛋白質是從E.coli (RB791)/pALVPITAC中純化出來,其二級結構
先以各種預測法如根據胺基酸序列的方法,與一相類似且已知立體結構的SV40 VP1
作胺基酸序列比對,以及以far-UV CD 光譜預測二級結構含量等等方法預測,結果
顯示polyoma 病毒VP1 是一含有高量β-sheet(-30﹪) 和低量α-helix (6-9﹪)的
蛋白質。
VP1 含有7個 Trp,其在VP1 蛋白質的分佈是以其螢光光譜及各種quenchers 來研
究,結果顯示VP1 對acrylamide, I﹣ 和Cs等的accessibility 分別為76.6﹪,
48.5﹪和27.6﹪,表示約有5個Trp是位於VP1表面的部份,而2個則位於其內部。
各種因素如,pH, [Ca]和[NaCl]等對於VP1 構形的影嚮以CD和螢光的方法偵測。
結果顯示VP1 在pH 3至9 中很穩定,在pH小於3 時,VP1 失去緊密的三級結構,但
仍維持其二級結構,在pH大於10後有明顯的coil增加趨向。[Ca]對VP1 的螢光有
quenching 的作用,表示可能是Cabinding 或VP1 蛋白質間的聚合產生,near-
UV之CD亦顯示其強度有增加的情形。[NaCl]則對VP1 的二級結構沒有作用。
VP1 的穩定性是以光譜方法偵測denaturants 和surfactants 對VP1 結構的作用來
評估。SDS 可增加VP1 α-helix和coil含量,及減少β-sheet和turn含量,實驗並
發現VP1 的構形改變可能與micelles的形成有關。
VP1 在 GdnHCl 中的變性作用顯示對三級結構及二級結構的轉變中點分別在0.7 和
1.94 M GdnHCl ,顯示變性過程中可能有中間物的存在,在1 M NaCl下 GdnHCl 對
VP1 的變性曲線,也顯示大約在1 M GdnHCl中間物可穩定存在。Refolding 的實驗
顯示已變性的VP1 無法完全回復成native的狀態。綜合以上表示VP1 的變性作用可
能涉及複雜的過程,而無法將其假設為two-state 平衡。

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