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本實驗的目的是分離雞蛋卵清蛋白和大頭鰱腦下腺性刺激素α、β次單元的寡糖並研究其結構。 卵清蛋白經Trypsin水解以Concanavalin A(ConA)-Sepharose affinity column分離glycopeptides,部份glycopeptides利用Reverse-phase HPLC,分離最短glycopeptide,氧基酸定序決定糖化位置為Asn 293。其餘glycopeptides以N-glycopeptide F切除寡糖,得到的寡糖混合物經過螢光標示後,以gel-filtration及HPLC分離各個Pyridylamino(PA-)寡糖。 大頭鏈腦下腺粉末以Hartree溶液萃取得粗糖蛋白,利用DEAE-cellulose column,不同濃度碳酸氫銨循序洗滌分離得到四部份(DE 1-4),reverse-phase HPLC 解析DE 1-4,以氨基酸組成分析及鑑定,結果於DE 1 發現性腺激素游離α次單元﹔DE 2發現性腺刺激素(α、β dimer);DE 3、DE 4發現性腺刺激素游離β次單元,收集游離α、β次單元,經PNGase切除寡糖得到寡糖混合物,經過螢光標示後,以gel-filtration及HPLC分離各個Pyridylamino(PA-)寡糖。
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