|
的活性變化是腫瘤細胞的重要生物指標。文獻指出，測量癌症病患之腫瘤組織的
脫氫活性可當為治療的預後指針及化學制癌藥物選擇的參考。四唑鹽的還原反應
的原理已廣泛運用於組織化學及細胞化學的研究來測定組織或細胞的脫氫活性，
然而，這些傳統的方法若不是以全體組織塊定量全部細胞之平均值來表示，而忽略
了組織內的非均質或多樣性，就是雖可顧及多樣性，卻由於觀測的細胞有限而費時
且費力。因此，本研究的目的，是在建立以四唑鹽反應的原理與技術來應用於細胞
化學呈色反應，並以細胞流動圖形法測量腫瘤細胞之脫氫活性。
以Ehrlich 腹水型癌細胞之細胞懸浮液，利用四唑鹽 cyanoditolyltetrazolium
chloride (CTC)的還原反應；CTC 本身不具螢光，卻可還原成CTC formazan而呈鮮
紅色之具螢光結晶。運用此呈色特性經營光顯微鏡、分光計測量及細胞流動圖形法
可測量出腫瘤細胞的六種脫氫活性；即：乳酸脫氫(LDH EC 1.1.1.27) 、葡萄
糖６磷酸脫氫(G6PDH EC 1.1.1.49) 、甘油３磷酸脫氫(GDH EC 1.1.1.8)、異
檬檸酸脫氫(ICDH EC 1.1.1.42)、麩氨酸脫氫 (GLDH EC 1.4.1.3)、及琥珀酸
脫氫(SDH EC 1.3.99.1)。同時，以4'',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 為
對照螢光染劑來染出核去氧核糖核酸，進行DAPI/formazan 之雙重變項細胞流動圖
形測量，以表示脫氫活性和細胞周期的關係。接著，由同一檢體之細胞化學反應
後所得的吸光數率值配合細胞流動圖形測量所得的活性分佈結果，二者計算可得
出單位時間內每一陽性反應細胞之脫氫活性 (femtomol hydrogen ． positive
time﹣) 。本測量方法所得的Ehrlich 腹水型癌細胞之脫氫活性，LDH 為97.5
±29.8 fmol H．positive cell﹣．5min﹣，G6PDH為69.0±18.2 fmol H
．positive cell﹣．20min﹣，ICDH為10.6±0.6 fmol H．positive cell
﹣．20min﹣，GDH為25.3±5.1 fmol H．positive cell﹣．20min﹣，
GLDH為 19.0±2.7 fmol H．positive cell﹣．20min﹣，及SDH 為 29.7±
12.4 fmol H．positive cell﹣．20min﹣ 。此測量細胞懸浮液中之單一細
胞內的活性的方法，可提供研究細胞的活性的另一種選擇。
將這種建立於動物腫瘤模式的方法，應用到人類腫瘤的測量時，本項研究以德國明
斯特大學外科實驗室建立之13個原發性人類消化器癌細胞株，包括10個食道癌細胞
株、２個胰臟癌細胞株及１個胃癌細胞株，為主要材料，成功地測量出上述６種脫
氫的活性。因此，這種技術可當為對人類腫瘤細胞特性的研究及臨床應用的方法
。
|