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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:林芳源
研究生(外文):Lin Fung Wung
論文名稱:生物防治菌哈氏木黴菌之轉形作用
論文名稱(外文):Transformation system of biocontrol agent, Trichoderma harzianum.
指導教授:陳昇明陳昇明引用關係
指導教授(外文):J. S.-M. Tschen
學位類別:碩士
校院名稱:國立中興大學
系所名稱:植物學系
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
論文頁數:74
中文關鍵詞:哈氏木黴菌原生質體轉形作用
外文關鍵詞:Trichoderma harzianumprotoplasttransformation
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哈氏木黴菌是目前最常被用來防治植物病害的生物防治劑之一 .本論文主
要是以哈氏木黴菌為材料, 希望建立其轉形作用(transformation)的系統
並得到穩定的轉形菌株.首先利用 Novozyme 234細胞壁分解酵素分解哈氏
木黴菌的細胞璧 ,大約可以得到5乘10的六次方至10的八次方個高產量而
可利用於轉形作用的原生質體.在轉形作用方面以聚二乙醇(
polyethylene glycol) 和氯化鈣兩種藥劑的特性促使原生質體吸收外來
DNA,而本實驗所用的外來DNA 為質體 pUCH1 ,此質體帶有一段來自細菌
的抗hygromyci nB之基因,在此基因上游還接了一段絲狀真菌的啟動子(
promoter),可驅動此基因的表現,在轉形作用後便以此當做一個明顯的篩
選記號.關於轉形作用後原生質體的再生培養基,以己六醇(sorbitol)來穩
定原生質體內外滲透壓,再以抗生素hygromycin B加入馬鈴薯右旋糖洋菜
培養基中來篩選轉形菌株,以此種方式進行轉形作用便可在每微克的質體
DNA 中得到40至60個轉形菌株.最後在 DNA-DNA 的雜交實驗中可以發現
轉形菌株染色體DNA中插入多個 pUCH1質體.
Trichoderma harzianum is an effectivebiocontrolling agent
against many plant pathogens.The objective of this thesis is
to set up the transformation system for T. harzianum and get
the stable transformants. Protoplasts were obtained from T.
harzianum using lytic enzyme Novozyme 234.The yield of
protoplasts were 5000000-100000000 protoplasts per ml.The
transformation system based on the use of polyethylene glycol
and CaCl2. T.harzianum was transformed with pUCH1,a bacterial
plasmid containing the hygromycin - resistance hygB gene fused
to a promoter from the ascomycete Cochliobolus heterostrophus.
The system described here yield 40-60 transformants per ug
pUCH1 DNA. The selective medium contain 1.2M sorbitol and
overlay with the agar of hygromycinB. DNA-DNA hybridization
revealed multiple intergations ofthe pUCH1 plasmid into the T.
harzianum chromosome DNA.
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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