壹、前言
貳、材料與方法
一、供試藥劑來源（出品藥劑廠商）
二、供試菌種類及其來源
三、病毒及核酸之萃取純化
（一）、病毒之萃取純化
（二）、病毒核酸之萃取純化
（三）、黑穗病菌菌體中dsRNA 之萃取
（四）、黑穗病菌病毒核酸種類之確定
四、病毒抗血清製作及黑穗病菌病毒感染之血清測定
（一）、玉米黑穗病菌病毒之抗血清製備
（二）、免疫球蛋白（r-gloublin）之純化與標識
（三）、酵素免疫球蛋白結合體（Enzyme-labeled conjugate）之製備
（四）、雙層夾心式酵素連結抗體分析法（DAS-ELISA） 應用於黑穗病菌病毒感染
之偵測
五、互補DNA(cDNA) 的製作
（一）、dsRNA 之回收
（二）、Poly(A) 的黏合
（三）、cDNA的製備
（四）、切齊cDNA末端
六、RI adaptors 之黏合
（一）、Adaptors 之黏合過程
（二）、磷酸化（Kinasing）Eco RI adaptors 之末端（ends）
（三）、Xho Ⅰ 剪切（digestion）及未黏合（unligated）adaptors之去除
七、DNA 片段的選殖
（一）、載體（vector）與DNA 黏合之方法
（二）、生體外裝填DNA 於λ噬菌體
（三）、溶菌斑之形成與挑取
（四）、Phagemid之生體內切取（in vivo excision）
（五）、質體DNA 的抽取及其含選殖DNA 之確定
八、利用所選殖DNA 片段製備核酸探針及其雜配分析
（一）、Class milk 回收DNA
（二）、核酸探針之製備及標識
（三）、北方黑點轉漬法（Northern dot blotting）
（四）、核酸探針與黑穗病菌病毒dsRNAs雜合（Hybridization） 及其呈色檢定
九、含病毒鞘蛋白基因cDNA選殖體之免疫抗體篩選
十、病毒感染與黑穗病菌形成致死蛋白質（Killer protein）之關係及其對不同黑
穗病菌之影響
（一）、不同黑穗病菌菌系之對峙培養
（二）、致死蛋白質之初步純化
（三）、製備級等電電泳系統（Bio Rad Rotofor IEF Cell）致死蛋白質之純化
參、結果
一、黑穗病菌病毒及核酸之萃取
（一）、玉米黑穗病菌病毒之純化
（二）、王米黑穗病菌病毒核酸之純化
（三）、黑穗病菌菌體中病毒dsRNA 之萃取純化及特性分析
二、雙層來心式酵素連結抗體法（DAS-ELISA） 於黑穗病菌病毒感染之血清偵測
三、病毒dsRNA 之對應cDNA選殖
四、所選殖DNA 片段核酸探針製備及北方墨點轉漬法（Northern dot blotting）
於病毒感染之檢測
五、西方轉漬法cDNA選殖體含病毒鞘蛋白基因之檢測
六、致死蛋白（Killer protein）之產生與作用
（一）、不同黑穗病菌菌系之對峙培養
（二）、不同黑穗病菌分離株產生致死蛋白之能力比較
（三）、製備級等電電泳系統病毒致死蛋白純化致死活性測定
肆、討論
伍、參考文獻
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