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矮南瓜黃化嵌紋病（ zucchini yellow mosaic virus，ZYMV ）危害世界各地之葫
蘆料作物， 成經濟上嚴重的損失。 蚜蟲媒介 ZYMV 需由病毒轉譯之協助成分（
pelper component；HC ）的存在，才能媒介成功。 本試驗主要探討不同緩衝液溶
液之酸鹹值、離子濃度、還原劑或鉗合劑等添加物、濃縮方式和在不同溫度下保存
時間，對 HC 活性的影響， 並進一步分離純化 HC，同時利用免疫螢光標識法，偵
測 HC 在 ZYMV 之寄主組織中出現的時間及分布狀況。首先分別利用不同酸鹹值之
緩衝液研磨病葉，在 100,000g 離純 90 分鐘後，所得含 HC 之上液，添加等體積
之純化病毒，再經由桃蚜以人工膜餵食方式，測試其傳毒能力，結果顯示其活性為
最高。還原劑及鉗合劑等的添加，對 HC 之活性並無顯著提高。含 HC 之上澄液經
96 小時保存後，除了置於 -20 ℃者仍有活性外，其它處理皆已失去活性。利用不
同分級沉降濃縮方式， 測試濃縮後 HC 之活性。 以含 8 ％（ W/V ） PEG 6,000
沉降所得之 HC 活性較佳。進一步利用 Sepharose CL-6B，DEAE 52 cellulose 及
oligod （ tT ） cellulose 純化 ZYMV-HC，並同樣以桃蚜測試其傳毒率，以作為
HC 活性之分析。 將含 HC 上澄液， 流經 Sepharose CL-6B 管柱，在波長 280nm
鑑視下，收集三個不同分子量吸收峰試液，經桃蚜測試結果，發現在第二個吸收峰
範圍試液中具有 HC 之活性有互補關係，因此進一步將其試液排列組合測試，結果
顯示並無增強或抑制的現象。收集濃縮第二吸收峰試液，流經 DEAE 52 cellulose
， 以去除帶負電之蛋白成分後，將此具 HC 活性存在之試液， 再以 oligo （ dT
） cdllulose 進一步純化， 發現其比活性顯著提昇約 517 倍。 另外， 以
Sepharose CL-6B 測試 HC 原性蛋白之分子量， 得知具活性之 HC 分子量約 100K
，而經由 10 ％ SDS-PAGE 和 western blct 測試後所得，不具活性之 HC 分子量
約為 50K。 欲瞭解 HC 在寄主組織內出現的時間及分布狀況，因此以 HC 之 F （
ab' ） 2-FITC 標識抗體，測試經汁液或蚜蟲接種之南瓜苗葉片，結果顯示經汁液
接種之接種半葉，在接種後第 9 小時， 上表皮層細胞始有螢光反應出現，而經由
桃蚜接種者，則需至 24 小時始可出現螢光反應；然而在上位葉的葉肉細胞，經汁
液接種者需經 24 小時後始可發現微弱螢光；而經桃蚜接種者，需至 48 小時才有
微弱螢光反應； HC 在上下表皮層細胞內之濃度，較葉肉細胞內之濃度為高，尤其
是在下表皮層細胞之濃度，又高於上表皮層細胞內之濃度。
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