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番茄嵌紋病毒（ ToMV ）在台灣的番茄及甜椒栽培區感染相當嚴重，故此一病毒病
害為植物病理極欲解決的問題， 本實驗之目的明在選殖 ToMV 之鞘蛋白及 54K 基
因， 解出其核聒酸序列，以了解其分子特性：並用以築 ToMV 鞘蛋白及 54K 轉型
植物，以便進遺傳工程交互保護試驗。 由本省番茄田中分到的 ToMV，大量純化，
再分出病毒之 RNA， 藉由廿個對應 ToMV CP 之申子及二對應 54K 基因的 pT54
clone,pTCP clone 經由限昀段的 subclones,pT54 則不次序剪裁的 clones, 以雙
去氧核聒酸鏈終止法解極，解出其核聒序列， 結果顯示 pTCP 全 690 個核聒酸含
全部鞘蛋白基因及 3' 端非轉譯區， 而且只有一個轉架構（ open reading frame
）， 可對映產生一含 158 個胺基酸， 分子量為 17.5k 的蛋白，而 pT54 全長度
1476 個核酸，對映產生一含 474 個胺基酸，分子量為 54k 的蛋白，與日本 ToMV
作比較， 在 CP 上有 3 個核不同， 但胺基酸則完全相同，在 54k 基因上則有 7
個核聒酸不同， 一個胺基酸不同， 顯示台灣之 ToMV 和日本之 ToMV 幾近相同。
CDNA clone pTCP 及 pT54 在生體外（ in vitro ）進行轉錄及轉譯作用， pTCP
可產生一 17.5k 的蛋白。 同時 pTCP 之 CP 片段轉殖到 Ti 二位元體 pBI121 上
， 作煙草轉型作用，在選擇性培養基超養 6 週生成轉型壁草，包括 ToMV 局部疝
斑寄主 N.tabacum cv.Havana 六個 Lines 之轉型煙草、 系統性寄主 Nicotiana
tabacum cv. Samsun 九個 lines 及 N.tabacum cv. Xanthi 五個 lines 之轉型
， 以西方墨點法、ELISA 偵測得到 CP 的蛋白質產常，同時以 PCR 亦可致大轉型
植物染體中的 CP DNA 片段，生接種 ToMV 1ug/ml，此鞘蛋白轉型煙草在局部病斑
之草中， 與非轉型植物比較只產生其 18-21% 病斑數， 而系統性中， 接種 ToMV
0.5ug/ml，與非轉型植常比較病徵廷緩 3-18 天出現。 另 pT54 之 54k 基因片段
以同樣方法構轉型煙草（包括系統性及局部病斑之寄主）， 可以 PCR 放大偵測得
到 54K 的 DNA，接種試驗初步結果顯示 54K 轉型煙草對 ToMV 具有抗性。此一實
驗解析出台灣 ToMV 的蛋白及 54K 基南酸序列， 並了解其物性由煙草之構築提供
一防治模式於台灣目前被 ToMV 為害相當嚴重之作物，如番茄、甜椒及辣椒等。
#9305455
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