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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:莊苓萍
研究生(外文):Zhuang, Ling-Ping
論文名稱:山羊﹑食品和臨床檢體中葡萄球菌及其毒素型之調查
論文名稱(外文):Survey of the enterotoxigenic types for staphylococcal isolates obtained from goats, food and clinical samples
指導教授:曾浩洋曾浩洋引用關係
指導教授(外文):Zeng, Hao-Yang
學位類別:碩士
校院名稱:國立中興大學
系所名稱:食品科技研究所
學門:農業科學學門
學類:食品科學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
論文頁數:71
中文關鍵詞:山羊葡萄球菌臨床檢體毒素食品科學營養學聚合■連鎖反應寡核■酸探針腸毒素
外文關鍵詞:FOOD-SCIENCENUTRITIONPolymeras chain reactionoligonucleotideDNA probe Staphylococcienterotoxin
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金黃色葡萄球菌為引起食物中毒的主要病原菌。其腸毒素類型一般可分為A,B,
C1,C2,C3,D,E七種血清型,而近年來,愈來愈多的學者指出非金黃色
葡萄球菌之葡萄球菌亦能產生腸毒素A,B,C,D,E型,而在國內產毒性之非
金黃色葡萄球菌之葡萄球菌其腸毒素之分佈則尚未有人研究。本研究因此擬探討在
健康山羊身上,食品,臨床檢體產毒性非金黃色葡萄球菌的分佈及毒素之特性。
雖然葡萄球菌毒素的檢測可用免疫分析方法進行,但是如RPLA檢測套組不能偵
測E型腸毒素,且將E型腸毒素誤判為A型;另外產毒條件受外界環境影響很大,
基因未能表現或產毒量不夠檢測限度等情況,因此可能把產毒菌株誤判為非產毒菌
株,或把E型誤判為A型等結果。所以本研究第一部分擬利用腸毒素型葡萄球菌特
異性之寡核酸探針和PCR引子偵測葡萄球菌毒素基因的存在,並與RPLA對
腸毒素檢測的方法比較,證明在標準產毒菌株的產毒條件下,部分非金黃色葡萄球
菌之葡萄球菌確具毒素基因,但RPLA偵測不到腸毒素的存在。
研究結果概述如下:自健康山羊身上分離出152株葡萄球菌,羊肉樣品分離出1
4株,臨床檢體60株,葡萄球菌以聚合連鎖反應(PCR)的方法檢測其腸毒
素基因時,測得健康山羊身上之葡萄球菌毒素型以D型為主,佔全部產毒菌株之
92.8﹪,全部菌株的 9.2﹪,而羊肉部分14株,產毒菌株5株,皆產D型腸毒素
,佔35.7﹪,和一般食品分析以A型腸毒素為主不同;而臨床檢體之葡萄球菌腸毒
素型以A型為主,佔產毒菌株的80﹪,全部菌株以13.3﹪。而這些具毒素基因的菌
株亦利用在標準產毒菌株的產毒條件下培養,以RPLA方法偵測,部分菌株並未
測得腸毒素的產生。因此以免疫分析法偵測產毒菌株時,與直接檢測其毒素基因的
方法,結果並不一致。
因為放射性探針有半衰期短,安全性差,廢棄物處理不易,及具有使用執照等缺點
存在,所以本研究第二部分擬發展非放射性DNA探針。但生物素標幟之探針前已
探討並不理想。因此本研究以毛地黃素標幟的非放射性探針取代32P標幟放射性探
針。但是菌落處理不易,干擾問題不易解決,改變雜交反應下仍未改進雜交結果之
問題,所以此部分的工作暫時停住。
PCR雖為一快速,靈敏,檢測基因存在的辦法,但仍不能區分來自死菌或活菌完
整的目標基因,因此本研究第三部分之工作,擬利用短時間預培養方法使活菌目標
DNA增量,而死菌不能增殖的前提下,可因目標基因因菌數增加的原因,PCR
產物的訊號漸強,藉以區分死菌及活菌。此外,將適度預培養的菌體加以適當稀釋
,使活菌仍有目標基因而有PCR產物,死菌則因稀釋而致目標基因量過少,而無
PCR產物,而得區分之。

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