金黃色葡萄球菌為引起食物中毒的主要病原菌。其腸毒素類型一般可分為Ａ，Ｂ，
Ｃ１，Ｃ２，Ｃ３，Ｄ，Ｅ七種血清型，而近年來，愈來愈多的學者指出非金黃色
葡萄球菌之葡萄球菌亦能產生腸毒素Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ型，而在國內產毒性之非
金黃色葡萄球菌之葡萄球菌其腸毒素之分佈則尚未有人研究。本研究因此擬探討在
健康山羊身上，食品，臨床檢體產毒性非金黃色葡萄球菌的分佈及毒素之特性。
雖然葡萄球菌毒素的檢測可用免疫分析方法進行，但是如ＲＰＬＡ檢測套組不能偵
測Ｅ型腸毒素，且將Ｅ型腸毒素誤判為Ａ型；另外產毒條件受外界環境影響很大，
基因未能表現或產毒量不夠檢測限度等情況，因此可能把產毒菌株誤判為非產毒菌
株，或把Ｅ型誤判為Ａ型等結果。所以本研究第一部分擬利用腸毒素型葡萄球菌特
異性之寡核酸探針和ＰＣＲ引子偵測葡萄球菌毒素基因的存在，並與ＲＰＬＡ對
腸毒素檢測的方法比較，證明在標準產毒菌株的產毒條件下，部分非金黃色葡萄球
菌之葡萄球菌確具毒素基因，但ＲＰＬＡ偵測不到腸毒素的存在。
研究結果概述如下：自健康山羊身上分離出１５２株葡萄球菌，羊肉樣品分離出１
４株，臨床檢體６０株，葡萄球菌以聚合連鎖反應（ＰＣＲ）的方法檢測其腸毒
素基因時，測得健康山羊身上之葡萄球菌毒素型以Ｄ型為主，佔全部產毒菌株之
92.8﹪，全部菌株的 9.2﹪，而羊肉部分１４株，產毒菌株５株，皆產Ｄ型腸毒素
，佔35.7﹪，和一般食品分析以Ａ型腸毒素為主不同；而臨床檢體之葡萄球菌腸毒
素型以Ａ型為主，佔產毒菌株的80﹪，全部菌株以13.3﹪。而這些具毒素基因的菌
株亦利用在標準產毒菌株的產毒條件下培養，以ＲＰＬＡ方法偵測，部分菌株並未
測得腸毒素的產生。因此以免疫分析法偵測產毒菌株時，與直接檢測其毒素基因的
方法，結果並不一致。
因為放射性探針有半衰期短，安全性差，廢棄物處理不易，及具有使用執照等缺點
存在，所以本研究第二部分擬發展非放射性ＤＮＡ探針。但生物素標幟之探針前已
探討並不理想。因此本研究以毛地黃素標幟的非放射性探針取代32Ｐ標幟放射性探
針。但是菌落處理不易，干擾問題不易解決，改變雜交反應下仍未改進雜交結果之
問題，所以此部分的工作暫時停住。
ＰＣＲ雖為一快速，靈敏，檢測基因存在的辦法，但仍不能區分來自死菌或活菌完
整的目標基因，因此本研究第三部分之工作，擬利用短時間預培養方法使活菌目標
ＤＮＡ增量，而死菌不能增殖的前提下，可因目標基因因菌數增加的原因，ＰＣＲ
產物的訊號漸強，藉以區分死菌及活菌。此外，將適度預培養的菌體加以適當稀釋
，使活菌仍有目標基因而有ＰＣＲ產物，死菌則因稀釋而致目標基因量過少，而無
ＰＣＲ產物，而得區分之。
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