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研究生:張吳順
研究生(外文):Chang Wu Shung
論文名稱:隨機選殖的DNA探針以鑑別革蘭氏陰性牙周致病菌Prevotellaintermedia
論文名稱(外文):Randomly Cloned DNA Probe for Identification of Gram negative Periodontal Pathogen of Prevotella intermedia
指導教授:彭先生劉先生陳先生陳先生引用關係丁先生周先生
指導教授(外文):Mr.PengMr.LiuMr.ChenMr.DinMr.Chuo
學位類別:碩士
校院名稱:國防醫學院
系所名稱:牙醫學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:牙醫學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
中文關鍵詞:雜合反應質體DNA pUC19牙齦下牙菌斑妊娠牙齦炎
外文關鍵詞:DNA片段探針DNA Fragment probehybridizationplasmid DNA pUC19subgingival plaquepregnancy gingivitis
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牙周炎主要是由牙齦下牙菌斑(subgingival plaque)中的細菌所引起,其
中的Prevotella intermedia主要被認為與毀壞性牙周病,如:急性壞死
性牙齦炎(acute necrotizing ulcerative gi- ngivitis)、妊娠牙齦炎(
pregnancy gingivitis)、成人型牙周炎(ad- ult periodontitis)等有關
。牙周炎的致病菌大多生長緩慢,且要在絕對的厭氧環境下才可生長,所
以Prevotella intermedia 若要由傳統的分離培養方法或生化的方法去鑑
別,則時間、人力、物力都要消耗很多。一個比較簡單的方法是利用DNA
探針的方法去鑑別,不僅在專一性及靈敏性可以提高很多,而且時間上可
以節省很多。在本實驗中,我們以標準菌種Prevotella intermedia
ATCC 25611, NCTC 9336,89K大量培養,再用限制脢HindⅢ切成小的片
段。隨機選殖大小片段DNA,片段長度由1kb至20kb左右。與經HindⅢ處理
後的質體DNA pUC19,經接合後,轉形至E. coliJM83內。再經培養及篩選
,分離出殖入的DNA片段後,以Multiprime DNA labelling method標誌
32P成探針,或random priming method的非放射性標誌digoxigenin成探
針。然後,再與上述標準菌種或其他參考菌種的DNA進行雜合反應(
hibrdization),來檢試並求取具有專一性的DNA片段探針。將此探針與國
外訂製的合成探針比較其專一性。此DNA探針可快速鑑定臨床上牙周致病
菌P.intermedia。

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