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研究生:謝奉家
研究生(外文):Hsieh,Feng-Chia
論文名稱:參與雌激素受體DNA結合區轉錄活化作用之DNA序列
論文名稱(外文):DNA sequences essential for efficient transcription activation
指導教授:張自忠
指導教授(外文):Chang,Tsu-Chung
學位類別:碩士
校院名稱:國防醫學院
系所名稱:生物化學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
論文頁數:104
中文關鍵詞:卵黃蛋白基因雌激素細胞轉染轉錄因子
外文關鍵詞:vitellogeninestrogentransfectiontranscription factors
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卵黃蛋白基因(vitellogenin)具有顯著的雌激素誘發效應,所以是研究
固醇激素分子生物功能的最佳模式之一。為了有效探討卵黃蛋白基因啟動
區的轉錄活化序列,本研究成功地構建卵黃蛋白基因 5’未轉錄端各突變
型質體,並應用於細胞轉染反應。發現雌激素反應序列(ERE)轉錄活性
確實與其在啟動區的距離位置有關,並証明在卵黃蛋白 B1 基因( VITB1
)啟動區 -95至 -41 片段含有能夠中介(mediate)雌激素受體或 DNA
結合區(DBD)轉錄活性之某些 DNA 活化序列。凝膠位移分析爪蟾的細胞
粗萃取液,顯示細胞中存有某些蛋白質因子會與 VITB1 -95至 -31間
DNA 活化序列結合。在競爭反應中,發現有二個以上的 DNA 活化序列能
與蛋白質因子結合,其結合可能為類似或不同的蛋白質因子。將細胞粗萃
取液經 S-Sepharose 及用啟動區 -95至 -31 DNA 片段所製備的
Specific -DNA affinity 層析管後,雖然仍有雜質存在,但在 21 kD及
36kD 附近發現有增加現象,顯示可能有許多橫向作用(trans-acting)
轉錄因子能夠與此段 DNA 結合。

The extraordinary effect of estrogen induction of vitellogenin
gene transcription presents a model system for the study of the
molecular mechanism underlying steroid regulation of gene
expre- ssion.In order to identify the potential DNA sequence
elements essential for transcription activation of vitellogenin
promoter, we constructed a series of promoter mutants and
studied the eff- ect of each mutation on transcription activity
by transient transfection and CAT assays.We demonstrated that
the promoter region of -95 to -41,in addition to the region of
-120 to -95,is also involved in the constitutive transcription
activation of vitellogenin promoter by the DNA binding domain
(DBD) of estro- gen receptor.The results also showed a strong
position- dependence of the estrogen response element (ERE) in
transcri- ption activation.Gel mobility shift assays using
Xenopus cell extract indicated the presence of at least two
sequence ele- ments within -95 to -31 which are capable of
binding protein factors with high affinity and specificity.
Competition assays demonstrated that these protein factors are
the same or close related proteins in a family.S-Sepharose and
sequence specific DNA affinity chromatography were used in an
attempt to purify the -95 to -31 DNA sequence specific binding
proteins from Xenopus whole cell extract.SDS-PAGE of the pooled
fractions with specific DNA-binding activity revealed two
enriched protein bands with 21kD and 36kD in size.These results
indicated that the promoter sequence studied would be likely to
interact with multiple trans-acting transcription factors.

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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