增生細胞核蛋白(proliferating cell nuclear antigen)簡稱PCNA,已知
是DNA聚合 ?的輔助因子,在DNA合成上扮演不可或缺的角色,為DNA複製
機構(replication apparatus)的一份子(subunit),且為形成穩定的複製
機構所必需o利用免疫螢光染色的方法發現,PCNA在核內的分佈與DNA合成
非常相似,隨著細胞週期S期的進行,PCNA的核內分佈會發生明顯改變 o至
今,是那機制控制此蛋白核內的重新分佈,則尚不清楚o本論文的主旨在探
討此蛋白的磷酸化是否與其核內分佈有關o利用免疫沉澱(immuno-
precipitation)的方法,將35S-蛋胺酸或32P-磷酸根標示過的中國倉鼠細
胞(CHO-K1)萃取物中的PCNA,用抗血清(antiserum)或單株抗體(
monoclonal antibody)沉澱出,以SDS-PAGE及Phosphoimage分析結果,發現
PCNA在核內的重分佈,並不源於此蛋白的磷酸化或其他轉譯後的修飾(
post-trans- lational modification)o另外,一個45KD的蛋白質可與PCNA
一起被沉澱下來,且在S期此蛋白會被大量的磷酸化,因此,此45KD蛋白質可
能是PCNA的結合蛋白,並與PCNA核內的重分佈及DNA複製機構的形成有關o