跳到主要內容

臺灣博碩士論文加值系統

(44.222.104.206) 您好!臺灣時間:2024/05/30 00:12
字體大小: 字級放大   字級縮小   預設字形  
回查詢結果 :::

詳目顯示

我願授權國圖
: 
twitterline
研究生:潘承恩
研究生(外文):Pan, Chen En
論文名稱:在大腸桿菌表現並純化一個豬腦神經突觸接合區的蛋白質
論文名稱(外文):Expression and purification of a porcine syanptic junction protein in Eshcherichia coli.
指導教授:周姽嫄
指導教授(外文):Chow Wei Yuan
學位類別:碩士
校院名稱:國立清華大學
系所名稱:輻射生物研究所
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
中文關鍵詞:神經後突觸緻密體神經突觸接合區表現載體
外文關鍵詞:Postsynaptic densitySynaptic junctionExpression vector
相關次數:
  • 被引用被引用:0
  • 點閱點閱:119
  • 評分評分:
  • 下載下載:0
  • 收藏至我的研究室書目清單書目收藏:0
中樞神經系統的神經後突觸緻密體(postsynaptic density,PSD)是一位在
神經後突觸膜下方, 電顯深染的緊密蛋白質結構。生化分析結果指出,PSD
可能直接或間接參與神經衝動傳導的調節。神經接合區 (synaptic
junction, SJ)蛋白質, 其包括90%以上的PSD, 被用來當作研究PSD的啟
始材料。利用SDS-PAGE初步分離SJ蛋白質, 切取90KDa位置的蛋白質膠
體, 經注射兔子後得到一多株抗體,Anti-90K Ab。再利用Anti-90K Ab篩
選豬腦cDNA library, 而獲得一1.6Kb的CW1 cDNA。為了進一步證實CW1
cDNA是否帶有encoding 90KDa SJ 蛋白質的遺傳訊息, 因此CW1 cDNA被選
殖到pGEX-2KS表現載體中並且送到E.coli中大量表現glutathione-S-
transferase(GST)/CW1 相融合的融合蛋白質(fusion protein), p83GST
。帶有GST的融合蛋白質, p83GST 可經由glutathione Sepharose 4B
affinity column純化出來, 並且經由蛋白 thrombin 作用, 可將26KDa
GST和57KDa之CW1 cDNA表現蛋白截切分離, 再一次通過glutathione
affinity column即可除去26KDa GST 蛋白質而純化出57KDa的CW1 cDNA
表現蛋白。為進一步簡化CW1 cDNA 表現蛋白的純化步驟, 因此改選用
pQE-31表現載體來表現 CW1 cDNA。CW1 cDNA被選殖到pQE-31載體後送到
E.coli中, 可大量表現- 57KDa 之6XHis/CW1相融合的蛋白質, p57His
。此帶有6XHis的p57His融合蛋白質可經由Ni-nitrilotriacetic acid(
Ni-NTA) resin column純化出來。再利用純化的p57His蛋白質注射兔子
後, 獲得一株可同時辨識p83GST及90KDa SJ蛋白質的兔子抗體血清, 90B
anti-serum。在競爭實驗以及免疫吸附分析的實驗中, 顯示p83GST蛋白質
可以競爭掉 90B anti-serum中辨識90KDa SJ蛋白質的recognition
sties,因此初步證實CW1 cDNA確實帶有可以encoding 90KDa SJ蛋白質的
遺傳訊息。

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
第一頁 上一頁 下一頁 最後一頁 top