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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:陳知信
研究生(外文):Chih-Hsin Chen
論文名稱:一、D型肝炎病原在病毒RNA組合上之角色二、D型肝炎在大腸桿菌中之表現
論文名稱(外文):1. The involvement of delta antigen in RNA packaging of
指導教授:張明富
指導教授(外文):Ming-Fu Chang
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:生化學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
論文頁數:83
外文關鍵詞:D 型肝炎病毒B 型肝炎病毒D 型肝炎抗原基因體包表現載體大腸桿菌Hepatitis delta virusHepatitis B virusDelta antigen
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本論文第一部份乃在研究二種 delta 抗原對於病毒顆粒形成時包裹病毒
基因的角色。除了確認何種delta 抗原可包裹基因體外,並且針對delta
抗原的各功能區作探討。包括包裹基因體的能力, 幫助或抑制基因體的
複製。研究的方法乃利用二種抗原各種不同的突變種, 在提供基因體模
板及 B 型肝炎病毒表面抗原的表現載體下作細胞轉染後, 收集病毒顆粒
以分析其 RNA 及蛋白質組成,及分析細胞內病毒基因體複製的狀況。得
到下列結果及結論:一、 二種 delta 均可負責包裹基因體且抗原的
RNA 結合區域為此功能所必須。 二、小型 delta 抗原的 short
leucine zipper-like motif 對於其包裹基因體並不必須。 三、在適當
的兩種抗原比例下,小型 delta 小型 delta 抗原可與大型 delta 抗原
共同協力包裹基因體。 四、小型 delta 抗原有幫助包裹正確長度基因體
至病毒顆粒的能力。五、大型 delta 抗原的抑制病毒複製作用, 並非僅
藉羧端區域的交互作用而達成。六、大型 delta 抗原羧端19 個胺基酸前
的 Gly/Pro-rich 區域可能為抑制功能的調控區域。進一步為了研究二種
抗原在結構上的差異,將 delta 抗原大量表現及純化以作為 X 光結晶繞
射的研究乃為重要的工作。因此我們建立一套可以大量表現 delta 抗原
及容易純化的蛋白質表現系統。利用由 T7 RNA 聚合■所調控的 pET 載
體於大腸桿菌中表現蛋白質。依結果在 37 ℃ 及 2 小時誘導時間條件下
,可將兩種 delta 抗原以可溶性的型式表現出來。並以免疫沉澱的結果
,說明這種重組蛋白質結構抗原性與細胞內所表現的delta抗原可能為相
似。

The first part of this thesis is to study roles of HDAgs in
packaging the viral genome during viral assembly. In
addition, functions of HDAgs involved in supporting and
inhibiting the replication of HDV were study. To approach the
problems, culture cells were transfected with various mutant
constructs of large and small HDAgs in the presence of
HDV cDNA and a plasmid encoding the small form of HBAgs.
Viral particles were collected four to six days
posttransfection and the presence of HDV RNA and HDAgs were
analyzed. Results are summarized as following: (1) Both HDAgs
can package the HDV genome and the RNA-binding region in the
middle domain is essential for this function. (2)The short
leucine zipper-like motifs of small HDAg is not essential for
the assembly of HDV RNA. (3) Small and large HDAgs, with a
proper ratio, can package viral genome cooperatively during
assembly.(4) In the presence of small HDAg, the viral particles
contain mainly the full-length RNA genome. (5) Interactions
between the N- termini of small and large HDAgs may not be
the only mechanism of large HDAg in inhibiting the viral
replication. (6) The C-ter- minal Pro/Gly-rich region of
large HDAg may be important for the inhibition of HDV
replication. The second part of this study focuses on the
expression of HDAgs as the first step towards
understanding the structure difference between two HDAgs. The
pET expression system which is under the control of T7 RNA
polymerases was used. Both HDAgs could be expressed as
soluble proteins after induction with IPTG for 2 hr at 37℃.
From immunoprecipitation assay, antigenicities of the
recombinant HDAgs may be similar to those of HDAgs ex-
pressed in transfected cells.

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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