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研究生:蔡志賢
研究生(外文):Jyh-Shyan Tsay
論文名稱:綿棗兒之組織培養與基因轉殖
論文名稱(外文):Tissue culture and gene transfer of Scilla sinensis (Lindl.)Merr.
指導教授:張唯勤
指導教授(外文):Wei-Chin Chang
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:園藝學系
學門:農業科學學門
學類:園藝學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
中文關鍵詞:綿棗兒組織培養體胚發生基因轉殖粒子槍乾燥種子基因浸潤法
外文關鍵詞:Scilla sinensistissue culturesomatic embryogenesis
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綿棗兒之葉片可在含Naphthalene acetic acid(NAA)0.4-3 milligram
per liter 配合Benzyladenine(BA) 0.4-10 milligram per liter 之
MS( Murashige & Skoog)固態培養基中發生體胚,以而於BA 0.1-0.4
milligram per liter 配合NAA 1-3 milligram per liter 之MS 固態培
養基中則可發生不定根;其鱗片可在含NAA(0.1-1 milligram per liter
)配合BA (3-10 milligram per liter)之MS固態培養基中直接發生體胚,
而於含NAA 0.1-5 milligram per liter 之MS固態培養基中可發生不定根
;花梗則可在含NAA (3 milligram per liter)配合BA(0.1-5 milligram
per liter)之MS 固態培養基中產生體胚;根則在含 NAA(0.5-3
milligram per liter)配合 BA( 0.5-5 milligram per liter)之 MS固態
培養基中經癒合組織發生不定根;綿棗兒之葉片及鱗莖皆可在含高濃度之
auxin(NAA及BA各10 milligram per liter )之MS培養基中產生大量之癒
合組織。葉片在含 2,4-dichloro- phenoxy aceticacid(2,4-D) 2
milligram per liter配合GA(Gibberellic acid) 及 BA 各 1
milligram per liter 之 MS 培養基中亦可產生大量之癒合組織,此癒合
組織可於原培養基中繼代培養,而於含 NAA 及 BA 各 1 milligram per
liter 之MS 培養基與含 NAA 0.4 milligram per liter、 GA 0.1
milligram per liter 及BA 8 milligram per liter 之MS 培養基中培養
可產生體胚。綿棗兒葉片基部經酵素處理分離成原生質體後,於含有
NAA 及 BA 各 1 milligram per liter 及葡萄糖0.6 mole 之MS液態培養
基中靜置培養三週後可開始分裂,兩個月後可分裂成數個細胞。將
pBI221 DNA 包覆於1.6 micrometer 金粒上以粒子槍進行基因轉殖 (壓
力650 pounds per square inch ,真空度25 inches mercuric ,距離
6 公分)。槍擊鱗片只得到β-glucuronidase (GUS)活性短暫表現;槍擊
癒合組織則在2個月後仍可測得GUS活性表現並經聚合■連鎖反應(
polymerase chain reaction)證實轉殖之癒合組織基因組中具 GUS 基因
,此癒合組織並已形成體胚。而將綿棗兒乾燥成熟之種子浸泡於含
pBI221 DNA 1000 microgram per microliter溶液中12 小時,經二天後
可以組織化學法於種子之胚乳及子葉中測得GUS 的活性表現。
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