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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:吳慧如
研究生(外文):Wu, Hui-Ju
論文名稱:逢機增殖多型性去氧核糖核酸(RAPD)片段作為高粱RFLP分析之探針的可行性研究
論文名稱(外文):Availability of Using RAPD(Random Amplified Polymorphic (DNA) Segments as Hybridization Probes in Sorghum RFLP analysis
指導教授:謝兆樞謝兆樞引用關係
指導教授(外文):Hsieh, Jaw-Shu
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:農藝學系
學門:農業科學學門
學類:一般農業學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1993
畢業學年度:81
語文別:中文
論文頁數:95
中文關鍵詞:限制■切割片段長度多型性逢機增殖多型性核酸高粱
外文關鍵詞:RFLPRAPDsorghum
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利用分子標幟探討分子層次上生物間的遺傳歧異度,以及用以建立聯鎖圖
譜並藉此找出特定基因,一直是近年來分子生物學發展的一項重要課題。
就分子標幟的種類而言,大致可分:(1)限制■切割片段長度多型性 (簡
稱RFLP)標幟;(2)逢機增殖多型性核酸(簡稱RAPD)標幟。其中RFLP標幟的
取得,一般而言,需花費一段時間與精力篩選所構築的基因庫,才可得到
具有能偵測物種間多型性潛力的探針。然而,繼聚合■鏈狀反應(簡稱
PCR)技術發展以後,更發展了所謂的RAPD標幟,即利用逢機引子進行PCR
分析,並配合電泳圖譜做為鑑定物種間多型性存在與否的方法,。現已由
各方面應用結果證實,RAPD的確具有做為另一分子標幟來源的莫大潛力。
就高粱[Sorghum bicolor (L.) Moench]RFLP聯鎖圖譜的構築而言,目前
為止,均是由PstⅠ及HpaⅡ兩基因組集合庫中篩選有效的探針。本論文即
在探討以RAPD分析中表現多型性的片段做為RFLP分析之探針來源的可行性
,以期對RFLP圖譜之建立有所助益。試驗中,以V-3與V-160兩親本的葉片
基因組DNA,經221個逢機引子進行增殖反應,以篩選具多型性表現的增殖
片段,並以其做為RFLP分析之探針。結果顯示,在221個引子中,共篩
得192個具多型性表現的片段,其中有142個片段已進行隨後之RFLP分析;
在此142個片段中約有75%的片段大小大於1.0kb;以此進行RFLP分析後,
顯示其表現型式大多屬於多套序列 (multiple copy)型式。同時,在所得
到的142個片段中,有54個片段能探測出二親本間具有的多型性現象。同
時,我們利用在相同探針的偵測下,某特定限制■可以使基因組DNA表現
多型性的概率,與其他限制■可以使相同的基因組DNA也表現多型性概率
的關係,加以探討在高粱基因組中造成RFLP現象的主要機制為何。在同時
可偵測出多型性的限制■數目與各狀況下可偵測多型性的探針數進行迴歸
分析結果中得知,造成高粱RFLP現象的主因可能是由於DNA片段的插入/缺
失所造成。然而,鹽基取代也可能是造成高粱基因組DNA的RFLP的另一個
因素。
The molecular markers had been developed as a powerful tool for
the studies in plant genetics and breeding. There are two
types of molecular markers : one is restriction fragment length
polymorphism (RFLP) marker, and the other is random amplified
polymorphic DNA (RAPD) marker. In order to obtain the RFLP
markers, it should take a long time and spend much resources to
construct and screen a genetic library. However, since the
polymerase chain reaction (PCR) technique was developed, it
has revolutionized the RAPD marker production. RAPD markers
are polymorphic DNA segments separated by gel electrophoresis
after PCR amplification using random primers. Genetic analysis
with RAPD markers is fast and involves no radioactivity and
hybridization. For our current sorghum RFLP map construction,
we had screened the informative probes from a PstI and a HpaII
genomic libraries. In this study, we exploited the
availability of using polymorphic DNA segments appeared in RAPD
analysis as probes in RFLPs. Two sorghum parents, V-3 and
V-160, were used as sources of DNA. We had screened out 192
amplified segments in 221 arbitrary 10-mer primers. And 142 of
them had been used in RFLP analysis. Most of them were with a
fragment size larger than 1.0 kb and shown to be multiple
copies. There were 54 segments shown to be suitable as RFLP
probes in these 142 segments. To explore the features of RFLP
in sorghum, the relationship between the probability that a
given enzyme detected polymorphism with a given probe in this
study and the number of other enzymes detecting polymorphism
with the same probe was plotted for regression. The result of
regression suggested that insertion/ deletion was the major
mechanism for generating RFLPs in the sorghum genome, however,
the base replacement was not excluded.
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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