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研究生:方麗雯
研究生(外文):Fang Li-Wen
論文名稱:花藥特異基因起動子之表現及篩選
論文名稱(外文):Expression and screening of anther specific promoters
指導教授:陳良築
指導教授(外文):Chen Liang-Jwu
學位類別:碩士
校院名稱:國立中興大學
系所名稱:分子生物研究所
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1994
畢業學年度:82
語文別:中文
論文頁數:67
中文關鍵詞:花藥特異基因起動子聚合 鏈鎖反應
外文關鍵詞:Anther specific genePromoterPolymerase chain reaction
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本試驗利用菸草花藥特異基因 TA29 的核酸序列,設計兩段引子 AS29A
及 AS28B ,以聚合 連鎖反應的技術,從菸草染色體中分離出 366 bp
的 TA29 起動子區域。將此起動子接於含 GUS 基因的植物表現載體上,
構築成 pBIA129 ,經由農桿菌將 pBIA129 送入菸草中,其中的 5 株再
生植株以聚合連鎖反應及南方墨點法分析,確定 GUS 基因已嵌入轉殖
菸草的染色體中。北方墨點法亦偵測到 GUS mRNA 在花藥有較多的表現量
,組織化學法分析 GUS 酵素的活性,也已證實 GUS 在 TA29 起動子的調
控下,僅在轉殖菸草花藥的營養層細胞表現,而在葉子其他的組織並不表
現。顯示出利用聚合連鎖反應分離出來的 TA29 起動子區域仍具有控制
組織特異表現的能力。從油菜花藥分離到的 cDNA 選殖株 BA112 ,已由
北方墨點法及定位雜交分析,證實為營養層細胞的特異基因。本試驗利
用 BA112 為探針,欲從油菜染色體基因庫中選出 BA112 的染色體基因。
從 250,000 個噬菌體中篩選出 36個,其中的一個選殖株 gBA05 ,與
BA112 的 5' 端序列有強的雜交訊息。經縮小範圍之後,得到的 pZXE08
選殖系,比對其核酸序列與原為探針的 cDNA 選殖株 BA112 ,僅有 78%
相似性,可能為不同的基因,因此本試驗篩得之 gBA05 選殖株是否仍具
有花藥特異性表現之特性尚需進一步分析。

According to the sequence information for the promoter region
of TA29, a pair of primers AS29A and AS28B that could
specifically amplify this promoter region was synthesized and a
DNA fragment of 366 bp containing the promoter region of TA29
was then amplified from tobacco genomic DNA by polymerase chain
reaction ( PCR ). To test the tissue specific function of this
PCR amplified promoter fragment, a chimeric gene construct
pBIA129 that contains this 366 bps promoter region fused to GUS
reporter gene was obtained. Through agrobacteria transformation
system, five kanamycin resistant tobacco plants were screened
and the existence of this chimeric gene for each kanamycin
resistant tobacco plant was demonstrated by PCR and Southern
analysis. Histochemical analysis demonstrated that the GUS
enzyme activity was expressed only in the tapetal cells of the
third stage of tobacco anther. The results indicated that the
PCR amplified promoter fragment could program the temporal and
spatial expression of GUS gene in transgenic tobaccos. A cDNA
clone BA112 that derived from the mRNA of Brassic anther was
previously demonstrated to be tapetal specific by Northern blot
and in situ hybridization analysis. To search for this tapetal
specific gene, a genomic library of Brassic napus was screened
with BA112 cDNA probe. After screening for about 2.5×105
plaques, there were 36 clones showed positively hybridized to
BA112 cDNA but only one clone gBA05 showed strongly hybridized
to an oligonucleotide probe BA19, an oligonucleotide probe
locates at the 5' end of BA112.

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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