(3.215.183.251) 您好!臺灣時間:2021/04/22 11:24
字體大小: 字級放大   字級縮小   預設字形  
回查詢結果

詳目顯示:::

我願授權國圖
: 
twitterline
研究生:范安瑜
研究生(外文):An-Yu Fahn
論文名稱:豬腦中纖維細胞生長因子的純離及其刺激兔子眼角膜纖維細胞增生的作用機制
論文名稱(外文):Purification of Fibroblast Growth Factor (FGF) from Porcine Brain and Its Mechanism on the Stimulation of Rabbit Corneal Fibroblast (RCF) Proliferation
指導教授:林銘德林銘德引用關係
指導教授(外文):Ming-Te Lin
學位類別:碩士
校院名稱:國立成功大學
系所名稱:生物化學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1994
畢業學年度:82
語文別:中文
論文頁數:85
中文關鍵詞:酸性纖維細胞生長因子鹼性纖維細胞生長因子肝素酪胺酸激■蛋白激■C磷脂酸
外文關鍵詞:aFGFbFGFHeparinTyrosine kinaseProtein kinase CPhosphatidic acid
相關次數:
  • 被引用被引用:0
  • 點閱點閱:145
  • 評分評分:系統版面圖檔系統版面圖檔系統版面圖檔系統版面圖檔系統版面圖檔
  • 下載下載:0
  • 收藏至我的研究室書目清單書目收藏:0
我們取豬腦的萃取物,利用不同濃度的鹽類沈澱、CM- SephadexC50管柱
層析法及Heparin-Sepharose管柱層析法得到二群具有活性的蛋白質,分
別將其命名為A群蛋白質(是在1.2MNaCl沖洗液由Heparin- Sepharose沖
洗出來)及B群蛋白質(是在1.6MNaCl沖洗液由Heparin- Sepharose沖洗
出來)。這二群蛋白質都會促進兔子眼角膜纖維細胞的增生,但是B群蛋白
質的作用較A群蛋白質強10倍。當使用肝素與A群及B群蛋白質共同培養兔
子眼角膜纖維細胞,則A群及B群蛋白質促進細胞增生的作用會增強2- 3倍
。由西方點墨法的結果我們知道:A群蛋白質會與酸性纖維細胞生長因子
的抗體、而B群蛋白質會與鹼性纖維細胞生長因子的抗體產生免疫交互反
應。由15%SDS-聚丙烯醯胺膠體電泳的結果我們知道:A群蛋白質是由二個
分子量分別是16.6kDa及18.8kDa的蛋白質所組成,而B群蛋白質是由四個
分子量分別是18kDa、19.8kDa、26kDa及29kDa的蛋白質所組成。由等電點
分析的結果我們知道:A群蛋白質的等電點是在6-7,而B群蛋白質的等電
點是在9-10。由此,我們認為A群蛋白質就是酸性纖維細胞生長因子 ,而
B群蛋白質就是鹼性纖維細胞生長因子,因為它們(1)具有相似的管柱層析
分析結果(2)相似的分子量(3)相似的等電點(4)肝素皆可以增強它們的生
理活性(5)分別會與酸性纖維細胞生長因子及鹼性細胞生長因子的抗體產
生免疫交互反應。至於纖維細胞生長因子促進兔子眼角膜纖維細胞增生的
作用機制是什麼?當使用一種專屬於酪胺酸激■的抑制劑,Genistein,
會抑制纖維細胞生長因子刺激兔子眼角膜細胞增生的作用。而另外一種蛋
白激■C的抑制劑,Staurosporine,雖然能夠阻斷PMA刺激兔子眼角膜纖
維細胞增生的作用,卻無法阻斷纖維細胞生長因子刺激兔子眼角膜纖維細
胞增生的作用。以酸性纖維細胞生長因子刺激兔子眼角膜纖維細胞,可以
使其大量地表現磷脂酸,而且磷脂酸會促進兔子眼角膜纖維細胞的增生。
總合以上所得的結果我們知道:(1)纖維細胞生長因子與其接受體接合後
,活化接受體上酪胺酸激■的活性是必須(2)蛋白激■C的活化可能與纖維
細胞生長因子刺激兔子眼角膜纖維細胞增生的作用無關(3)由磷脂■D水解
磷脂質而產生的磷脂酸是參與在纖維細胞生長因子刺激兔子眼角膜纖維細
胞增生的作用。

We isolated two groups of protein,protein group A(eluted from
Heparin-Sepharose at 1.2MNaCl)and protein group B(eluted from
Heparin-Sepharose at 1.6MNaCl),from porcine brain.They could
stimulate RCF(Rabbit Corneal Fibroblast)proliferation,but
protein group B was 10 times more potent than protein group A.
Western blot analysis showed that protein group A reacted with
aFGF antibody,while protein group B reacted with bFGF antibody.
The molecular weights of protein group A were about 16.6kDa and
18.8kDa and that of protein group B were about 18kDa,19.8kDa,
26kDa and 29kDa.The pI of protein group A was 6-7 and that of
protein group B was 9-10.The possibility that the protein group
A and protein group B were related to,if not identical with,
aFGF and bFGF was supported by observations that they had(1)
similar retention behavior on Heparin-Sepharose
chromatography(2)similar molecular weights(3)similar
isoelectric points(4)potentiation of activity in the presence
of heparin and that(5)they cross-react with antibodies to aFGF
and bFGF.What was then the mechanism that FGF stimulated the
RCF proliferation.Genistein,a tyrosine kinase- specific
inhibitor,inhibited the FGF-induced RCF proliferation.
Staurosporine,a protein kinase C(PKC)inhibitor,couldn't block
the FGF-induced RCF proliferation,but could block the PMA-
induced RCF proliferation.The aFGF induced phosphatidic acid(PA)
production in the RCF and the PA could stimulate the RCF
proliferation in a dose-dependent manner.Above all,we know
that(1)Binding of FGF to its receptor and activating the
receptor tyrosine kinase activity are required for the FGF-
induced RCF proliferation.(2) The protein kinase C(PKC)is not
involved in the FGF-induced RCF proliferation.(3)Phosphatidic
acid (PA),produced by phospholipase D(PLD)hydrolyzing
phospholipid,is also involved in the FGF- induced RCF
proliferation.

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
第一頁 上一頁 下一頁 最後一頁 top
系統版面圖檔 系統版面圖檔