本實驗乃利用豬腎上皮細胞離體培養系統做模式探討 緊迫豬和正常豬在
腎上皮促素或8-Br-cAMP刺激後其細胞和分子層面作用機制的差異。豬腎
上皮細胞先用0.1% Collagenase/ 0.01% DNAase 從腎上腺皮質部酵解出
來做初代培養, 在Ham's F12/DMEM 內加馬血清(12.5%),胎牛 血
清(2.5%),胰島素(10 ug/ml),攜鐵蛋白 (Transferrin, 5 ug/ml),皮纖維
細胞生長因子 (Basic fibroblast growth factor, 0.1 ng/ml)的培養液
中培養6-7天,再用來測試腎上皮促素(ACTH)及8-Br-cAMP誘發皮質醇(
Cortisol)釋放的時間及劑量效應, 再以8-Br-cAMP刺激探討細胞色素P450
基因的表現度, 利用放射免疫法檢測培養液中皮質醇或cAMP含量, 北方墨
染法檢測腎上皮細胞450 mRNA之表現度。結果顯示腎上皮促素或8-Br-
cAMP誘發腎上皮細胞釋放皮質醇呈現時間和劑量效應,腎上皮促素誘發皮
質醇釋放時cAMP的釋放亦伴隨著增加。8-Br-cAMP誘發腎上皮細胞P450
scc, P45017a, P450c21, P45011b的 mRNA 表達呈現時間和劑量效應。以
鹵乙烷測試判定的同胎緊迫豬和正常豬 ,經屠宰後,取腎上腺,培養其腎上
皮細胞,比較腎上皮促素或8-Br-cAMP誘發皮質醇釋放的時間劑量及 P450
基因表達的差異性。結果顯示緊迫公豬的腎上皮細胞在腎上皮促素及8-
Br-cAMP誘發下, 其皮質醇釋放的劑量較正常公豬為低, 而P450scc的基因
表達緊迫豬亦不如正常豬。因此推論緊迫豬的腎上皮細胞對腎上皮促素誘
發皮質醇釋放的效應能力低, 可能是因為P450scc基因表達速率有異之故
。