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十二脂氧酵素(Arachidonate12-Lipoxygenase)是首先在哺乳類組織中被
發現的脂氧酵素(Arachidonate x-Lipoxygenase)。十二脂氧酵素首先在
血小板中，接著在白血球中也被發現，且在這二種細胞所存在之十二脂氧
酵素是根據其受質催化的特異性及分子一級結構上之不同所區分。在人類
扁平上皮癌(A431)細胞中，十二脂氧酵素之代謝活性物質12-HETE，其生
成活性主要存在於微粒體中。指出是否十二脂氧酵素在分子一級結構上之
特性造成其在A431細胞中大量活性表現於微粒體。除此之外在脂氧酵素中
，包括5-lipoxygenase和血小板十二脂氧酵素皆存在有calcium-
dependent所造成脂氧酵素由細胞上清液中轉移至細胞內膜之報告，且其
轉移後活性主要存在於membrane fraction。為了回答這個問題，在本實
研究中採選殖A431細胞中表現之十二脂氧酵素之互補去氧核糖核酸cDNA。
根據HEL細胞十二脂氧酵素cDNA為模板設計引子primer，嘗試以RT-PCR的
方法來選殖A431細胞中十二脂氧酵素之cDNA。設計引子時將RT-PCR分為二
部分來進行，第一段由起始密碼至一個內切限制酵素EcORI 切位為0.9kb
，另一段為1.4kb由EcORI至polyadenylation signal。在選殖前半段0.9
kb 5'-terminal時遭遇一些問題，所以分成三段為520bp(primer-8
primer-3,466-985),480bp(primer-9 primer-13,-(12)-468)及845bp(
primer-12 primer-3,1829-985)分別進行RT-PCR。目前還有從起始密碼算
起0.1kb之核甘酸序列尚未確定，而在第605位之Val及第96位之Cys轉變為
Ser。目前並不能確定這個變異是否和酵素的存在於微粒體有關。但也有
可能是5'-terminal的核甘酸序列或是細胞內鈣離子之濃度和 A431細胞十
二脂氧酵素活性存在微粒體扮演重要的角色。
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