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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:吳哲夫
研究生(外文):Jer-Fu Wu
論文名稱:人類扁平上皮癌細胞微粒體性十二脂氧酵素基因的選殖及核甘酸之定序
論文名稱(外文):Molecular Identification of Micosomal 12-Lipoxygnease in Human Epidermoid Carcinoma A431 Cells
指導教授:張文昌張文昌引用關係
指導教授(外文):Wen-Cheng Chang      
學位類別:碩士
校院名稱:國立成功大學
系所名稱:藥理學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:藥學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1994
畢業學年度:82
語文別:中文
中文關鍵詞:十二脂氧酵素人類扁平上皮癌細胞
外文關鍵詞:12-Lipoxygenase12-LoA431 cells
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十二脂氧酵素(Arachidonate12-Lipoxygenase)是首先在哺乳類組織中被
發現的脂氧酵素(Arachidonate x-Lipoxygenase)。十二脂氧酵素首先在
血小板中,接著在白血球中也被發現,且在這二種細胞所存在之十二脂氧
酵素是根據其受質催化的特異性及分子一級結構上之不同所區分。在人類
扁平上皮癌(A431)細胞中,十二脂氧酵素之代謝活性物質12-HETE,其生
成活性主要存在於微粒體中。指出是否十二脂氧酵素在分子一級結構上之
特性造成其在A431細胞中大量活性表現於微粒體。除此之外在脂氧酵素中
,包括5-lipoxygenase和血小板十二脂氧酵素皆存在有calcium-
dependent所造成脂氧酵素由細胞上清液中轉移至細胞內膜之報告,且其
轉移後活性主要存在於membrane fraction。為了回答這個問題,在本實
研究中採選殖A431細胞中表現之十二脂氧酵素之互補去氧核糖核酸cDNA。
根據HEL細胞十二脂氧酵素cDNA為模板設計引子primer,嘗試以RT-PCR的
方法來選殖A431細胞中十二脂氧酵素之cDNA。設計引子時將RT-PCR分為二
部分來進行,第一段由起始密碼至一個內切限制酵素EcORI 切位為0.9kb
,另一段為1.4kb由EcORI至polyadenylation signal。在選殖前半段0.9
kb 5'-terminal時遭遇一些問題,所以分成三段為520bp(primer-8
primer-3,466-985),480bp(primer-9 primer-13,-(12)-468)及845bp(
primer-12 primer-3,1829-985)分別進行RT-PCR。目前還有從起始密碼算
起0.1kb之核甘酸序列尚未確定,而在第605位之Val及第96位之Cys轉變為
Ser。目前並不能確定這個變異是否和酵素的存在於微粒體有關。但也有
可能是5'-terminal的核甘酸序列或是細胞內鈣離子之濃度和 A431細胞十
二脂氧酵素活性存在微粒體扮演重要的角色。

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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