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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:廖朝暐
研究生(外文):Liao, Chao-Wei
論文名稱:綠膿桿菌外毒素A之功能研究及應用
論文名稱(外文):Functional analysis and application of PE
指導教授:黃昭蓮;許宗雄
指導教授(外文):Hwang Jaulang; Hseu Tzong-Hsiung
學位類別:博士
校院名稱:國立清華大學
系所名稱:生命科學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1994
畢業學年度:82
語文別:中文
中文關鍵詞:綠膿桿菌外毒素A功能
外文關鍵詞:Pseudomonas exotoxin AFunctionchimeric toxin
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本文乃是藉由蛋白質工程技術,從事探討綠膿桿菌外毒素A之功能及應用.
綠膿桿菌外毒素A區域Ia除了過去所認知的 - 外毒素與細胞表面接受器結
合器之專屬區域-外;本論文亦發現區域Ia胺基端存在了毒素在細胞上毒害
機制有關之其他功能,這些功能將會影響到毒素之細胞毒性.例如:區域 Ia
胺基端的突變影響外毒素與微粒體及人工合成之脂肪體的親和性.經由上
述之基礎研究,我們將之應用至EGF-PE融合毒素的設計上.將區域Ia胺基端
的34胺基酸及碳基端32胺基酸添加在EGF-PE融合毒素間.經修飾之融合毒
素EGF-PE(d34-220)具甚強之細胞毒性,尚且維持標的種別性.我們亦利用
PE區域I及II的輸送功能,將抑癌蛋白攜帶至細胞中,成功的發展 PE(
dIII)-p53抑癌融合蛋白.利用該系統將可從事抑癌機轉之探討.
封面
目錄
摘要
誌謝
圖目錄
表目錄
論文正文
第一章 緒言
第一節 綠膿桿菌外毒素A之毒性及毒害機制
第二節 PE之蛋白質結構與功能研究
[一] PE是由菌體分泌到菌體外之外毒素
[二] PE晶體結構分析
[三] 區域I功能與結構研究
[四] 區域II功能與結構研究
[五] 區域III功能與結構研究
第三節 PE的逆向路徑假說
第四節 PE區域Ia功能研究模式
第五節 標的專一性藥物開發之研究
第二章 實驗步驟與方法
第一節 綠膿桿菌外毒素A區域功能探討之實驗步驟
第二節 綠膿桿菌外毒素A區域功能探討之實驗材料
第三節 綠膿桿菌外毒素A區域功能探討之實驗方法
第四節 構築標的專一性融合毒素EGF-PE之實驗步驟
第五節 構築標的專一性融合毒素EGF-PE之實驗材料
第六節 構築標的專一性融合毒素EGF-PE之實驗方法
第三章 結果
第一節 PE及PE-EGF融合毒素之構築結果
[一] 利用PCR合成PE毒素的基因片段
[二] PE毒素的胺基端系列刪除(serial deletion)或定點突變(point mutation)質體之構築
[三] 嫁接表皮生長素(EGF)於PE羧基端之質體構築
[四] 大腸桿菌BL21(DE3)生產毒素
第二節 細胞毒性之檢測
[一] PE胺基端修飾導致PE之細胞毒性下降
[二] PE區域Ia胺基端系列刪除後導致PE-EGF融合毒素之細胞性下降
第三節 PE區域Ia進入細胞後之功能探討
[一] PE-EGF融合蛋白對於125I-EGF與EGF接受器結合之影響
[二] PE-EGF融合蛋白進入A431細胞後之穩定性
[三] PE區域Ia胺基端影響PE-EGF與microsomal membranes之結合能力
[四] Ia胺基端影響毒素與酸性脂肪體之結合力
第四節 融合毒素EGF-PE(△34-220)之構築
[一] PE區域Ia胺基端系列刪除之融合毒素EGF-PE
[二] 大腸桿菌BL21(DE3)生產EGF-PE(△34-220)
第五節 EGF-PE融合毒素之毒性檢測
[一] 標的種別性之細胞毒性檢測
[二] EGP-PE(△34-220)之細胞毒性檢測
第四章 討論
第一節 綠膿桿菌外毒素A區域Ia功能探討
第二節 融合毒素EGF-PE(△34-220)
第五章 參考文獻
圖表
英文附錄
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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