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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:楊允馨
研究生(外文):Yang,Yun-Hsin
論文名稱:小白鼠貯精囊自體抗原基因的初步研究
論文名稱(外文):Preliminary study of the gene structure of mouse seminal vesicle autoantigen
指導教授:陳義雄陳義雄引用關係
指導教授(外文):Chen,Y.-H.
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:生化科學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1994
畢業學年度:82
語文別:中文
論文頁數:47
中文關鍵詞:自體抗原貯精囊雄性素反應單元
外文關鍵詞:AutoantigenSeminal vesicleAndrogen-response element
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自小老鼠genomic library篩選出含貯精囊自體抗原(SVA)基因的genomic
clone;我們定序了SVA基因1016個核甘酸序列:包括第一個exon(122個
核甘酸),第一個intron的部份序列(172個核甘酸)及5'端區域(5'-
flanking region)之722個核甘酸的序列。由primer extension的結果定
出基因的轉錄起始位置在相對於轉譯起始位置5'端上游第27(A)及第28(A)
個核甘酸。 我們已知雄性素能刺激SVA在小白鼠貯精囊中的表現,由SVA
基因之核甘酸序列亦發現在SVA基因的5'端區域有兩段和保守的雄性素反
應單元(ARE)相似性極高的DNA單元(單元A, AGAACAaag AGTGTG,
-124∼-110;單元B, AGAACAttc TAATCT, -213∼-199)。兩單元和保守
的雄性素反應單元( consensus ARE sequence: AGAACAnnn TGTTCT)的相
似性分別為66.7%(單元A)和83.3%(單元B)。 將合成的雙股DNA(分別含
有單元A或單元B)與貯精囊核蛋白質抽取液進行mobility shift DNA
binding assay,此兩DNA單元皆可和某貯精囊核蛋白質呈現專一性的結合
。經由兩單元和此核蛋白質互相競爭結合的實驗,顯示單元B對此核蛋白質
的結合強度大於單元A. 為了進一步的檢視SVA基因上的單元A和單元B是
否確實具有androgen- dependent transcriptional enhancer的活性,我
們利用帶有CAT基因做為 reporter的兩個質體(pCAT-Basic, pCAT-
Promoter),將SVA基因5'端區域的不同段落或單獨的單元A或單元B分別鑲
入其中,建構了兩組重組的質體,預備進行transcriptional activity
assay。我們選用LNCap細胞做為CAT-fusion plasmid的表現細胞。初步
以 positive control (pCAT-Control vector)測試的結果,顯示目前所
建立的細胞培養,transfection及CAT assay之系統為可行。未來的工作
即是要對我們建構的兩組質體進行測試,以期對SVA受雄性素調控的機制
有進一步的了解。

From the analysis of a genomic clone screened from mouse DNA
Library, 1016-bp of SVA gene was established. They covered the
first exon (122bp), part of the first intron(172bp) and the
upstream 722bp from transcriptional start site. Sequence
analysis revealed two putative AREs as follows:one between
position -124 and -110 (element A, EA) and the other between
-213 and -199 (element B, EB)。 EA (AGAACAaagAGTGTG) and EB(
AGAACAttcTAATCT) have 66.7% and 83.3% sequence homology with
the consensus ARE (AGAACAnnnTGTTCT). Nuclear protein extract of
seminal vesicle was able to retard the synthetic EA or EB as
evident from mobility shift DNA assay. The interaction between
either elements and nuclear protein was specific and EB showed
stronger than EA in its affinity. In order to test if EA or EB
is able to act as an androgen- dependent transcriptional
enhancer, series of SVA 5'-flanking fragments were ligated to
pCAT-Basic while EA or EB fragment was inserted into pCAT-
Promoter. The constructed CAT-fusion plasmids could be
introduced into LNCap cells to examine the androgenic
inducibility of transcriptional activity. The systems of cell
culure, transfection and CAT assay have been successfully
established. Future work will be the test of these constructed
CAT-fusion plasmids to obtain more insight into the mechanism
of androgen action on SVA.

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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