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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:葉嘉新
研究生(外文):Chia-Hsin Yeh
論文名稱:百步蛇蛇毒成份血小板醣蛋白Ib拮抗劑Agkistin之精製及其作用之探討
論文名稱(外文):Purification and Characterization of the Platelet Glycoprotein Ib Antagonist, Agkistin, from Agkistrodon Acutus Venom
指導教授:黃德富
指導教授(外文):Tur-Fu Huang
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:藥理學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:藥學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1994
畢業學年度:82
語文別:中文
論文頁數:85
中文關鍵詞:百步蛇蛇毒蛋白人類血小板醣蛋白Ib凝結反應抗血栓藥物
外文關鍵詞:Agkistrodon acutussnake venom proteinglycoprotein Ib
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利用快速蛋白液態層析儀,將台灣百步蛇蛇毒依序以Mono-S、Superose與
Mono-Q層柱純化後,可得一拮抗ristocetin所引起人類血小板凝集反應,
命名為Agkistin。Agkistin以電泳分析,得知是一單一成份,由兩個次元
體分子量分別16,500與15,500道耳所組成之雙異元體。Agkistin不俱分解
纖維蛋白原作用、phospholipase A2或esterase活性。不論在人類富含血
小板血漿,或是在人類血小板懸浮液中,Agkistin均可隨濃度的增加而增
大其對ristocetin所引發血小板凝集與凝結反應的抑制活性。但對其它血
小板凝集引發劑,如collagen、U46619和ADP等則無明顯抑制作用。
Agkistin並不能有效抑制thrombin所引發血小板懸浮液的凝集反應,但它
能隨著濃度的增加而延長低濃度thrombin引起血小板凝集所須的潛伏期與
抑制thromboxane A2的生合成。相同的,對於低濃度 thrombin引起血小
板凝集反應,Agkistin也有明顯的抑制作用。 125I-Agkistin可呈濃度效
應關係與人類血小板結合。其與每個血小板的結合數目為61183±3649,
而解離常數為2.23±0.11x10-7M。此結合反應在一分鐘內即可達到飽和,
而且是呈可逆性的。血小板醣蛋白Ib的單源抗體AP1、6D1,幾乎能完全抑
制125I-Agkistin與血小板的結合。但血小板醣蛋白IIB-IIIa的單源抗體7
E3、蛇毒蛋白trigramin、EDTA與ADP等則完全沒有拮抗其結合作用。此外
在小白鼠的活體實驗中,靜脈注射的Agkistin可隨濃度的增加而延長其出
血時間,顯示其在體內也有相當的抑制活性。由以上結果可知,Agkistin
在有von Willebrand factor存在下的人類血小板懸浮液,對於
ristocetin所引發的血小板凝集與凝結反應,具有專一性的抑制作用。其
原因乃由於Agkistin選擇性地與血小板表面接受體醣蛋白Ib結合,進而拮
抗其與vWF的作用。因此,Agkistin可說是由天然物所分離出來之一種新
發現的血小板醣蛋白Ib拮抗劑。由於其在活體中也具有明顯的活性,吾人
可以利用它當作研究工具,藉由結構-活性的探討,來發展心方向的抗血
栓藥物。此外,醣蛋白Ib可能與血小板thromboxane A2生合成有關。而醣
蛋白Ib在thrombinc活化血小板過程中所扮演的角色,也可以藉此蛇毒蛋
白來加以探討。

By means of ionic exchanger and gel filtration chromatography,
a novel snake venom protein,Agkistin,purified from Agkistrodon
Acutus (hundred-pace snake) specifically inhibited ristocetin-
induced human platelet aggregation.Agkistin was homogenous as
judged by SDS-PAGE.Its apparant molecular weight was estimated
to be 28,700 daltons as measured by SDS-PAGE.Upon reduction,
Agkistin was shown to contain two subunits with molecular
weight of 16,500 and 15,500 daltons,respectively. In human
platelet-rich plasma and platelet suspension,Agkistin
concentration-dependently inhibited ristocetin-induced platelet
aggregation and agglutination.However,Agkistin apparatently did
not affect platelet aggregation induced by collagen,U46619 and
ADP.Agkistin did not inhibit thrombin-induced platelet aggrega-
tion of human platelet suspension.However,it concentration-de-
pendently inhibited thromboxane A2 formation and prolonged the
latent period in triggering aggregation by low dose of
thrombin. In platelet binding study,125I-Agkistin specifically
bound to unactivated platelets in a saturable manner.The number
of binding sites was estimated to be 61183±3649 per platelet
and the Kd values were estimated to be 2.23±0.11x10-7M.This
binding reac- tion is rapid and reversible.Monoclonal
antibodies,AP1 and 6D1 raised against platelet GPIb blocked
125I-Agkistin binding to platelets.However,monoclonal antibody,7
E3,raised against GP IIb- IIIa complex and snake venom peptide
trigramin,ADP and EDTA did not affect 125I-Agkistin binding
reaction.In vivo study,Agkistin significantly prolonged the
bleeding time of mice when given in- travenously.Therefore,
Agkistin may be utilized as a research tool to develop a new
class of antithrombotic drugs through the struc- ture-activity
relationship study,and to elucidate the role of GP Ib in the
activating process of platelets by thrombin.

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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