臺灣博碩士論文加值系統

本實驗室於先前的研究報告中已證實 p53 基因於人類功能性腎上腺腫瘤
( human functional adrenal neoplasms ) 中有高達 73 % 之突變率，
其突變熱點 ( hot spots ) 主要集中於譯碼 ( codon ) 100、102及
249；為了探討發生於功能性腎上腺腫瘤的幾個 p53 突變基因是否喪失其
正常轉錄活性，及其突變蛋白對正常腎上腺皮質細胞在腫瘤的形成 (
tumori- genesis ) 及荷爾蒙的分泌 ( steroidogenesis )所造成的影響
。首先利用共同轉染試驗 ( co-trans- fection assay ) 將帶有突變
p53 基因的表現質體 ( expression plasmid ) 及報告質體 ( reporter
plasmid ) 共同送入人類支氣管肺泡癌細胞株內，其結果顯示野生型 (
wild-type ) p53 能夠結合於結合位置，刺激轉錄下游氯黴素乙醯轉移
基因 ( CAT gene ) 的表現。另外分別發生於譯碼100、102 及 249 的突
變 P53 蛋白則喪失原有 90 % 的轉錄活性，只有譯碼117 突變之蛋白仍
然維持有 50 % 的活性。而在免疫沉澱法分析 ( immunoprecipitation
assay ) 中發現譯碼102 及 117 突變之蛋白質，可分別與四種不同的抗
p53 之單株抗體 ( anti-p53 monoclonal antibodies ) 反應，顯示其蛋
白質結構無明顯改變。但是譯碼249 突變之蛋白質僅能與 PAb 1620 及
PAb421 二種株抗體作用，其轉錄活性的下降有可能是因結構改變所造成
的；而發生無意義突變 ( nonsense mutation ) 的譯碼100 蛋白質則均
無法與所有抗體反應。另一方面, 將 p53 表現質體利用電流通孔法 (
electroporation ) 送入正常牛腎上腺皮質細胞內，經抗生素 ( G418 )
篩選並建立細胞株 ( stably transfected cell lines ) 後，其突變
P53 蛋白單獨表現並不改變細胞形態及無法使細胞在軟洋菜膠 ( soft
agar ) 上生長，此外在酵素免疫分析 ( EIA )結果亦證實不能影響細胞
分泌荷爾－可體松 ( cortisol ) 的能力，而只有發生在譯碼249 之 P53
蛋白單獨在腎上腺皮質細胞內表現，可造成細胞形態上輕微的變化。總結
本實結果，選殖自功能性腎上腺腫瘤的突變 p53 基因，確實降低其正常
的轉錄活性，但是蛋白質單獨的表現卻不能造成細胞的轉形及影響荷爾蒙
的製作與分泌。