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研究生:余瑞卿
研究生(外文):Yu, Rui-Qing
論文名稱:白絹病菌生理特性及其核酸探針之製備
論文名稱(外文):PHYSIOLOGICAL CHARACTERISTICS AND DEVELOPMENT OF DNA PROBES OF SCLEROTIUM ROLFSII SACC
指導教授:陳隆鐘
指導教授(外文):Chen, Long-Zhong
學位類別:碩士
校院名稱:國立中興大學
系所名稱:植物病理學研究所
學門:農業科學學門
學類:植物保護學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1995
畢業學年度:83
語文別:中文
論文頁數:53
中文關鍵詞:白絹病菌粒腺體核酸重組質體轉型菌株植物病理植物學昆蟲學
外文關鍵詞:SCLEROTIUM ROLFSIIMITOCHONDRIAL DNARECOMBINANT PLASMIDTRANSFORMANTSPLANT-PATHOLOGYBOTANYENTOMOLOGYSclerotium rolfsiimitochondrial DNArecombinant plasmidtransformants
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收集之白絹病菌菌株,最佳的生長溫度為28-32C,在28C以下或32C以上皆不
利其菌絲生長;相對溼度100%時為菌絲最佳生長條件.菌核可在含有葡萄
糖,果糖,麥芽糖及蔗糖的培養基中發芽生長,而於含有乳糖,可溶性澱粉
,半乳糖及纖維素培養基中,則不利於菌核發芽生長.在各種氮.菌絲生長之
素源之探討上,當培養基內含有亞硝酸鈉時,白絹病菌之菌核無法發芽生長
情形,各菌株在缺硝酸銨,硫酸鎂,硫酸鋅時,會抑制白絹病菌菌絲生長
,而缺其他之元素磷酸鉀,亞磷酸鉀,氯化鐵,硫酸銅,硫酸錳時,對白
絹病菌菌絲生長之影響略小.在菌核,形成型方面,大致可分為A 型者
有 15株,R 型者有7 株,非A 非R 之中間型者有28株.以氯化銫梯度離
心法(CsCl-bisbenzimide density gradient centrifugation)
, 由總量DNA(total DNA)中萃取出粒腺體核酸(mtDNA)及核仁核酸(nDNA
),藉由內限制酵素EcoR 將其切成不同大小片段,經選殖於質體
pBlue -script(SK+)中,並轉形於Escherichia coli DH5■內,以獲得具有
崁入DNA重組質體(recombinant plasmid)之轉形菌株(transformants).自
菌株8040 02經轉形作用後,得到103個白色大腸桿菌轉形株;而自菌
株804021經轉形作用後,得到80個白色大腸桿菌轉形株.這些轉型株經過微
量質體抽取 (alkaline lysis),內限制酵素EcoR 酵解及電泳分析後,確定
其所攜帶之質體為帶有外來DNA片段之重組質體(recombinant plasmid).
以此mtDNA片段依其大小可將重組質體分為三群;大於2.96kb,小於2.96至1
kb之間及小於 1kb三群,在小於2.96kb至1kb之間及小於1kb二群中,篩選重
組質體804002 -69(0.53kb), 804002-14(0.45kb), 804002-96(1.1kb),
804002-28(1.8kb); 804021-43(0,48kb), 804021-67(0.8kb),
804021-53(1.3kb), 804021-29 (1.15kb)和Sclerotium rolfsii,
Sclerotinia sclerotiorum及Rhizoc- tonia solani之全DNA進行點雜配(
dot hybridization) 反應.結果以 804021-53之雜合反應顯示此探針與大
部份Sclerotium rolfsii 之全DNA具有親合性.在此八個粒腺體DNA片段之
大小與限制圖譜皆不具相似性.利用探針804021-53以點雜配法進行敏感性
測定時,可有效偵測到菌株804027全DNA濃度至,偵測探針804021-53粒腺體
核酸片段時有效濃度為. 探針804021-53以點雜配法進行百合種球(白雪
內,外鱗片;白狐狸內,外鱗片以及白雪,白狐狸種球外土壤萃取液)組織敏
感性測定時,偵測有效濃度各為 , , , .

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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