Candida rugosa能生產菌體外脂肪晦、其脂肪晦基因已有五種被發表，其重要特性
為CTG 密碼產生Ser ，而非一般之Leu。CTG密碼在五個脂肪晦中有3%的使用率，其
中包括活性中心殘基209 。首先，以PCR 方法對LIP4殘基209 進行定位基因突變，
將CTG(Leu)的codon 改為TCG(Ser)送入E coli進行表現，結果產生不可溶而不具活
性之蛋白質。送入酵母菌一Saccharomyces cerevisiae進行誘導，以RT-PCR及West
ern blotting的結果顯示LIP4在Saccharomyces cerevisiae中有RNA 表現而無蛋白
質表現。之後，使用in vitro mutagenesis方法，將19個CTG(Leu)中的13個改為Se
r 的密碼，並進行蛋白質表現，而獲得之蛋白質仍不可溶而無活性。
以PCR 的方式獲得LIP3、LIP4的起動子DNA 。送入S.cerevisiae表現，以B-galact
osidase 測知起動子強弱。L3P 強度為L4P 的3~15倍，依不同的培養條件下而有差
異。
以不同培養條件培養C.rugosa發現加入Tween 20，Triton X-100及乙醇，可使脂肪
晦活性大大提高，並有受質特異性的改變。以半乳糖取代葡萄糖為碳源，活性亦明
顯上升。
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