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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:姚盈娥
研究生(外文):Yao, Ying-Erh
論文名稱:小菜蛾麩胱甘�B轉基�AcDNA之選殖
論文名稱(外文):Molecular Cloning of a Glutathione S-Transferase cDNA of the Diamondback Moth Plutella xylostella(L.)
指導教授:孫志寧, 胡念台
指導教授(外文):Chih-Ning Sun, Nien -Tai Hu
學位類別:碩士
校院名稱:國立中興大學
系所名稱:昆蟲學系
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1996
畢業學年度:84
語文別:中文
論文頁數:44
中文關鍵詞:麩胱甘轉基小菜蛾有機磷殺蟲劑抗性基因選殖
外文關鍵詞:Glutathione S-transferasePlutella xylostellaOrganophosphate-resistanceMolecular cloning
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在十字花科蔬菜害蟲小菜蛾 Plutella xylostella (L.) 幼蟲體內,已
知存有四個 glutathione S-transferase (GST) 異構,其中
GST-3 與 GST-4 對受質 DCNB 和部份有機磷殺蟲劑如 parathion,
methyl parathion 和 paraoxon 的活性較 GST-1 與 GST-2 高,且兩者
之間具有免疫相關性。本工作目的在於選殖與小菜蛾對有機磷殺蟲劑抗性
有關的一個異構 GST-3。利用小菜蛾中腸 cDNA 為 template,以
GST-3 與該蛋白質經cyanogen bromide 剪切後所得的 16.1 kDa 胜片
段之 N 端胺基酸列所設計的 primers,進行 reverse transcription -
polymerase chain reaction,可得到一個 128 bp 產物。利用此段 DNA
為探針,篩選抗甲基巴拉松 MPA 品系小菜蛾中腸 cDNA library ,得到
GST-3 cDNA PxGST3全長為 809 bp ,encode 216 個胺基酸,此蛋白質次
單元經計算之分子量為 27,956 Da, 預測之 pI 值為 9.37。PxGST3 與
同為鱗翅目的 Manduca sexta MsGST1有 46.3% 的 identity ,與果蠅
DmGST1、DmGST27、DsimGST 以及家蠅 MdGST1、MdGST2a 有 33.0-38.2%
的 identity,但與果蠅 DmGST2、Anopheles gambiae AgGST2 以及 M.
sexta MsGST2 則僅有 12.0-17.6% 的 identity。
Four glutathione S-transferase (GST, EC 2.5.1.18) isozymes have
been characterized in the diamondback moth (DBM), Plutella
xylostella (L.), an important insect pest of crucifers in Taiwan
and many regions throughout the world. This work aimed at
cloning the cDNA of GST-3, one of the isozymes involved in this
insect resistance to some organophosphorus insecticides.
Reverse-transcription polymerase chain reaction was performed
using cDNA of DBM larvae as template and degenerate primers
based on the N-terminal amino acid sequences of GST-3 and a
CNBr-cleaved 16.1 kDa fragment of this protein. A 128 bp product
was obtained and subsequently used as the probe to screen a cDNA
library prepared from a methyl parathion-resistant MPA strain.
Two GST-3 cDNA clones were obtained and sequenced. Both were
proved to be the same and the longer clone, pGTPx3, of 809 bp
encoded a protein of 216 amino acids with a predicted molecular
weight of 27,956 and isoelectric point of 9.37. This GST-3 of
DBM PxGST3, shared 46.3% sequence identity to MsGST1 of Manduca
sexta, the first and only other lepidopterous insect whose GST
cDNAs have been cloned. It was 33.0-38.2% identical in amino
acid sequence to DmGST1 and DmGST27 of Drosophila melanogaster,
and MdGST1 of Musca domestica. PxGST3 had a very low identity
(12.0-17.6%) with DmGST2 of D. melanogaster, AgGST2 of Anopheles
gambiae and MsGST2 of M. sexta.
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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