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研究生:鄭兆秋
研究生(外文):JAW-Chiou Cheng
論文名稱:創傷弧菌蛋白質分解酵素基因之選殖與DNA序列分析
論文名稱(外文):Cloning and DNA sequence analysis of the protease gene in vibrio vulnificus
指導教授:何漣漪
指導教授(外文):Lien-I Hor
學位類別:碩士
校院名稱:國立成功大學
系所名稱:微生物及免役學研究所
學門:生命科學學門
學類:微生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1996
畢業學年度:84
語文別:中文
論文頁數:85
中文關鍵詞:創傷弧菌蛋白質分解酵素基因選殖序列分析
外文關鍵詞:Vibrio vulnificusproteasecloningDNA sequence
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創傷弧菌為生存於海水環境中之革蘭氏陰性細菌,在臨床上常造成嚴重的
敗血症及肢體壞死,過程相當迅速且死亡率高。創傷弧菌可產生多種與致
病有關的毒力因子,其中蛋白質分解酵素被指出和造成宿主的血管通透性
增加乃至形成水腫有關。為了能進一步以遺傳學方法探討蛋白質分解酵素
在致病機轉中所扮演的角色,本論文研究首先在大腸桿菌DH5alfa內,以
pBR322做為載體,構築了一個創傷弧菌的基因庫,並且從中選殖出蛋白質
分解酵素基因。此基因庫含有約8000株選殖株。從約5000個菌落中共篩選
出11個具有產蛋白質分解酵素能力的選殖株;各選殖株所含質體DNA的插
入片段,分屬於四種不同的限制圖譜(restriction patterns) 。針對其
中一株進行次選殖後,得到一仍具有蛋白質分解酵素活性的插入片段,長
度約為3.1 kb。將此 3.1 kb 片段做DNA序列分析,發現其中唯一可能的
開放閱讀架為 1,830 鹼基對,可轉譯出610個胺基酸,分子量約為66 kD
。過去已從創傷弧菌的純化蛋白質分解酵素,定出其N端胺基酸的部分序
列,此序列亦出現在本研究所選殖的蛋白質分解酵素之中。若以此序列做
為成熟型蛋白質分解酵素的N端起始位置,則重新推算的胺基酸序列共
含414個胺基酸,分子量44 kD,等電點為5.47,與過去發表的創傷弧菌純
化之蛋白質分解酵素相似。另外,此選殖的蛋白質分解酵素在加熱至60℃
以上時失去活性,為對熱不穩定之蛋白質。以電腦與已知之各類蛋白質分
解酵素做相似性分析,推測本蛋白質分解酵素應屬於需要鋅離子做為輔因
子 (cofactor) 的金屬蛋白質分解酵素 (metallo- protease)。整個胺基
酸序列與其他已發表的弧菌屬金屬蛋白質分解酵素,具有相當高的相似性
,而且在其胺基酸序列中找到3個可能是鋅離子結合的區域,其中的一區
域具有大部分蛋白質分解酵素的共同保留區域,His-Glu-X-X-His。
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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