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研究生:卓怡孜
研究生(外文):Zhuo, Yi-Zi
論文名稱:TrichodermakoningiiG-39之β-木糖甘酵素之純化與性質研究
論文名稱(外文):Purification and Characterization of β-xylosidase from Trichoderma koningii G-39
指導教授:李耀坤李耀坤引用關係
指導教授(外文):Li, Yau-Kun
學位類別:碩士
校院名稱:國立交通大學
系所名稱:應用化學研究所
學門:自然科學學門
學類:化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1996
畢業學年度:84
語文別:中文
中文關鍵詞:木糖甘酵素木糖寡醣
外文關鍵詞:Trichoderma koningii G-39xylooligosaccharideB-xylosidase
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木糖甘酵素(B-xylosidase)能將木糖寡醣(xylooligosaccharide) 或雙醣(xylobio
se) 水解成木糖單糖(xylose),是木聚糖(xylan) 水解系統中,一個很重要的酵素
。許多微生物都可以產生此一酵素,本實驗選擇Trichoderma koningii G-39 為菌
種,以木聚醣為唯一碳源時,木糖甘酵素可被誘導產生。本實驗純化出兩種木糖甘
酵素,木糖甘酵素I 利用陽離子交換管柱(SP-Trisacryl-M)及凝膠體層析管柱(Sep
hadex G-100)純化。木糖甘酵素II則利用陰離子交換管柱(DEM及Mono Q) 純化,均
可達90% 以上純度。利用蛋白質電冰分析及凝膠體管柱層析,測得木糖甘酵素I 分
子量約54 kDa,木糖甘酵素II分子量約104 kDa ,兩者皆為單分子蛋白質。
木糖甘酵素1在25°C時,於pH2.25~pH6.8之間穩定度佳。木糖甘酵素II在37 °C時
,於pH2.5~pH7.4 之間穩定度佳。木糖甘酵素I 對p-nitrophenyl-B-D-xylopyanos
ide(PNXP) 之pH profile呈現鐘形曲線,由pK1=2.1 與pK2=5.1 所調控。其最通化
pH值於3.6~3.8 間。而木糖甘酵素II則在pH3.5~4.0 活性最大。木糖甘酵素I 對基
質有極佳之專一性,木糖甘酵素II則有較寬鬆之專一性,其對p-nitrophenyl-B-D-
galactoside 及p-nitrophenyl-a-L-arobinoside 之活性約為PNXP之10% 。木糖甘
酵素I 對PNXP有很大之KM值,約於40~50mM 間,表示其對PNXP之結合力不強,而對
2,4-dinitrophenyl-B-D-xylopyranoside(2,4-DNXP)之結合力稍強(25。C,KM=24mM
) ,且kcat為PNXP之90倍。木糖甘酵素II對基質PNXP與2,4-DNXP卻有很強之結合力
(25°C KM 約0.05mM) ,而對2,4-DNXP之Kcat約為PNXP之2.5 倍。
在酵素表現方面,以木糖甘酵素I 之基因段pxyl,利用載體pet22b(+) 植入細菌BL
21中表現,利用不含peB Leader段之pet22b(+) ,則蛋白質表現於細胞質(cytosol
) 中; 而保留peB Leader段者將蛋白質引導至periplasma間,結果蛋白質以包涵體
(inclusion body)之慾呈現,但皆為無活性之酵素。
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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