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研究生:謝幸媚
研究生(外文):Hsing-Mei Hsieh
論文名稱:水稻類金屬硫蛋白基因在逆境中之表現與其啟動子活性之分析
論文名稱(外文):Expression of Rice Metallothionein-like Genes Under Stress and Analysis of the Promoter Activity
指導教授:黃秉乾
指導教授(外文):Pien-Chien Huang
學位類別:博士
校院名稱:國立清華大學
系所名稱:生命科學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1996
畢業學年度:84
語文別:中文
中文關鍵詞:類金屬硫蛋白逆境北方雜交試驗
外文關鍵詞:Metallothionein-like proteinsstressNorthern hybridization
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本論文以水稻為材料,探討植物類金屬硫蛋白基因的存在,於逆境中的表
現情形及其調控的機制。由水稻分離出兩個類金屬硫蛋白基因的 cDNA,
OsMT-1 ( Oryza sativa metallothionein-like gene-1 ) 及 OsMT-2 (
Oryza sativa metallothionein-like gene-2 ),依其可能傳譯 (
translation ) 出的蛋白序列推測,分別屬於第一及第二型 ( type 1
and 2 ) 的類金屬硫蛋白基因 ( metallothionein-like gene )。北方雜
交試驗 ( Northern hybridization ) 結果指出,OsMT-1 可受逆境誘發
,如熱休克、過量銅、養份缺乏(缺糖)及老化等,但生長激素 ABA (
abscisic acid ) 則抑制其表現。OsMT-2 雖亦受熱休克及養份缺乏所誘
發,但銅離子反而稍為抑制其表現。由此結果作比較,推測逆境影響
OsMT-1 是經由金屬或直接作用在5'-端調控區的途徑,而對OsMt-2是直接
經由5'-端調控區或非金屬性的間接調控。本論文進一步由基因組基因庫
( genomic library ) 篩選得 OsMT-1 的完整基因序列 rgMT-1 ( rice
genomic metallohionein-like gene-1 )。由其5'-端啟動子區 (
promoter ) 及上游核甘酸序列的分析,得知其中含兩組典型的 TATA 盒
及多個擬基因調節序列。經 GUS (β-glucuronidase )報導基因系統的測
試,結果顯示,啟動子的活性位於 -73 到 -36 之間,而內插子 (
intron ) 的存在,可增強基因的表現。
封面
目錄
謝誌
英文縮寫
中文摘要
Abstract
Ⅰ.序言
1.逆境與克服逆境的物質
2.金屬硫蛋白
3.植物類金屬硫蛋白
4.植物類金屬硫蛋白基因受金屬及其他因素的影響
5.植物類金屬硫蛋白基因啟動子區序列及活性
6.本論文研究的主題
Ⅱ.材料與方法
一.材料
1.水稻植物器官及懸浮細胞的來源
2.引子
二.方法
1.水稻基因組DNA的萃取
2.聚合酵素連鎖反應
3.核□酸的定序
4.水稻類金屬硫蛋白基因的篩選
5.以不同的逆境及生長激素ABA處理水稻懸浮細胞
6.水稻植物器官及懸浮細胞RNA的萃取
7.北方雜交試驗
8.南方雜交試驗
9.rgMT-1套數(copy number)的測定
10.rgMT-1啟動子區及報導基因GUS之重組DNA的構築
11.重組DNA的轉殖
12.GUS的活性分析
Ⅲ.結果
1.聚合酵素連鎖反應及反轉錄-聚合酵素連鎖反應
2.器官表現特異性
3.互補DNA基因庫的篩選
4.逆境對於水稻類金屬硫蛋白基因的影響
5.基因組DNA基因庫的篩選
6.南方雜交試驗
7.rgMT-1的限制圖譜
8.rgMT-1套數的測定
9.rgMT-1的啟動子活性
Ⅳ.討論
1.兩組類金屬硫蛋白基因存在的証據與其意義
2.對逆境反應的特異性及其意義
3.類金屬硫蛋白基因表現調控的機制
4.啟動子的定位和活性
結論與展望
Ⅴ.參考文獻
Ⅵ.英文附錄
Part Ⅰ. A Novel Stress-Inducible Metallothionein-Like Gene from Rice
Part Ⅱ. RNA Expressiion Patterns of a Type 2 Metallothionein from Rice
Part Ⅲ. Type 1 Rice Metallothionein-Like Gene:Its Putative Upstream Cis-Elements, and Promoter Activity as Affected by Its Intron
Part Ⅳ. Transcripts of Metallothionein Genes in Arabidopsis thaliana
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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