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Sporamin為甘藷塊根中含量豐富的儲藏性蛋白質,因具有trypsin inhibitor活性,推論可能具有抗蟲能力。本實驗利用轉殖植物來研究 sporamin在栽培菸草( Nicotiana tabacum cv Wisconsin 38 )的表現情 形及抗蟲效應。將sporamin cDNA( 簡稱為TIA )之BamHI / XbaI片段接至 雙向載體( binary vector ) pBI121上,以直接轉型法( direct transformation )殖入農桿菌( Agrobacterium tumefaciens )LBA4404菌 株中,得到的轉殖菌株,以TIA cDNA為探針,進行南方雜合反應( Southern hybridization )確認無誤後,再利用葉圓片轉型法( leaf disc transformation )感染栽培菸草,誘導植株再生,經由100 ug/ml kanamycin篩選,得到六棵轉殖植株( Tb1-3, Tb6-8 ),在這些轉殖植株 中,TIA::pBI121插入菸草基因組 ( gemone )的數目及位置皆不同,除 Tb8外,均能轉錄TIA mRNA( 0.9 kb )及少量的TIA-GUS mRNA( 2.7 kb )菸草轉殖植株經自交產生的種子,以含 200 ug/ml kanamycin培養基測 定是對kanamycin的抗性,顯示TIA::pBI121能穩定遺傳給子代。由蛋白質 活性分析得知,除Tb6外,轉殖植株均含有 trypsin inhibitor活性。最 後以斜紋夜盜蟲( Spodoptera litura )後,其存活率及體重均受影響, 顯示sporamin具有抗蟲性質,可作為試劑及作物基因轉殖的材料。
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