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人類T 細胞白血病病毒第一型及第二型(Human T cell Leukemia Virus type I an d type II,HTLV-I and HTLV-II) 的基因序列約有65% 的相似性。HTLV-I的流行地 區主要是分佈在日本西南部,中部非洲及加勒比海地區。與HTLV-I相關的疾病包括 有成人T 細胞白血病(Adult T cell Leukemia/Lymphoma,ATL)及HTLV-I相關脊髓神 經病變(HTLV-I associated myelopathy/tropical spastic parapraesis,HAM/TSP ) 。HTLV-II 的流行地區則是在中南美洲,其最早是由毛細胞白血病(atipical ha iry cell leukemia)病人身上所分離出來。而在DNA 疫苗部份,目前已知應用在B 型肝炎、流行性感冒及愛滋病等研究上,並發現DNA 疫苗是可以誘導宿主產生體液 性免疫反應及細胞性免疫反應。因此在本實驗中,即利用HTLV-I及HTLV-II 基因重 組蛋白質疫苗及DNA 疫苗,以兔子做為動物模型,進行免疫注射以觀察其保護性抗 體反應。 在基因重組蛋白質疫苗的部份,我們利用大腸桿菌表現並純化基因重組蛋白質RP-B 1 及RP-IIB,為分別為表現HTLV-I及HTLV-II 外套膜蛋白質第116 至201 胺基酸及 第96至235 胺基酸序列,做為疫苗,對兔子進行六次皮下免疫注射後,再給予HTLV -I或HTLV-II 的感染,利用西方墨點法及放射免疫沈澱法觀察兔子的抗體反應。由 實驗結果發現,在接受疫苗免疫注射的兔子中,RP-B1 所誘導約免疫反應較RP-IIB 的誘導效果差,且接受RP-B1 疫苗注射的兔子最後並無法免於HTLV-I的感染。而在 RP-IIB疫苗的實驗中,接受疫苗注射的七隻兔子中有六隻兔子可以產生明顯的anti -HTLV-II外套膜蛋白質的抗體,且其中一隻兔子(R7)於接受HTLV-II 感染細胞chal lenge 後仍未出現感染。因此RP-IIB基因重組蛋白質疫苗繼續進行第二次的實驗以 再確定其保護的免疫效果。 此外,我們利用融合細胞抑制法(syncytium inhibition assay)發現,R7其免疫注 射後之血清(Post-immunized serum)也含有對抗HTLV-II 病毒融合作用的抗體,與 R7免疫注射前之血清(pre-immunized serum) 相比,其免疫注射後之血清經1:10及 1:40的倍數稀釋後,可抑制HTLV-II 病毒81% 及48% 的融合作用。 由以上基因重組蛋白質疫苗實驗的結果,我們認為RP-IIB的140 個胺基酸為包含HT LV-II 外套膜蛋白質Bloop ,較僅含36個胺基酸的RP-B1 免疫原性好,因此將此相 對之HTLV-I及HTLV-II 的140 個胺基酸其DNA 基因序列選殖入pcDNA3載體,形成HT LV-I及HTLV-II DNA 疫苗,命名為pcDNA3-envl 及pcDNA3-envII,同時以這兩種質 體DN A為模版,利用試管內轉譯法(in vitro translation)可以表現HTLV-I及HTLV -II 外套膜蛋白質,因此將此DNA 疫苗以肌肉注射的方式對兔子進行免疫注射。
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