HBV 之調控序列除了起動子外,還包含兩個加強子ENI及ENII,兩者作用皆具有肝細 胞特異性。我們實驗室過去已證明ENII有二種功能:一是作為同源及異源起動子之加 強子,二是作為核心起動子上游調控序列(CURS)。在ENII的上游發現有另外一個負 調控序列NRE(negative regulatory element),位於nt 1613∼1636,可同時抑制 NEII之二種功能。 NRE結合蛋白由GEL SHIFT之分析可知存於GEPG2細胞核萃取液(NUCLEAR EXTRACT)通 過HEPARIN-SEPHAROSE之0.4M NaCl FRACTION中,並可和NRE形成專一性DNA-蛋白結合 物。以NRE序列篩選HepG2細胞株cDNA庫(以OLIGO DT作引子)得到11個NREBP cDNA clones。其中NREB9之(HIS) 6-BP9融合蛋白對於NRE DNA序列的結合具專一性,因 此BP9是很有潛力之NREBP候選者。 在本論文中,首先將BP9 cDNA clone約5kb為長,因此除了定其DNA序列外,並進一步 由正常男性肝細胞CDNA庫(由蔡世峰老師提供)選殖CDNA,得到約5.5KB之AL CDNA CLONE,具有較BP9長的3''端,以及18個相同的CDNA CLONE B1-B18約2.7KB和AL具有相 同之3''端。
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