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醇溶蛋白質基因 RP3 由台農 67 號水稻（Orzya sativacv）基因庫篩選
出來， RP3 啟 動子和β-D-glucuronidase（GUS）基因形成嵌合基因，
進行轉殖菸草（transgenic plantsexpression）和暫時性（transient
expression）表現實驗。轉殖菸草含有水稻 RP3 啟動子 1046 bp/GUS 嵌
合基因，會在種子有較高的 GUS 活性表現；其它部位如，根、莖和葉，
則活性較低。而菸草種子表現 GUS 活性較高約在開花後（DAF）9∼15 天
之間。若利用histochemical X-gluc 進行種子活染，則在菸草種子的胚
和胚乳都有 GUS 活性的表現。若由轉殖菸草（lines 2, 7, and 18）所
誘導出的懸浮細胞也會有 GUS 活性的表現，而在不同轉殖植株（lines
2, 7, and 18）中 GUS 有不同活性的表現，但活性最高和最低並未相差
到兩倍，但在懸浮細胞中 line 2 的 GUS 活性約為 line 7 和 line 18
的 6倍和 25 倍。所以在不同轉殖植株之間可能因生理的差異不相同而產
生不同的 GUS 活性。若將 RP3 promoter 縮減成不同長度經由粒子槍（
particle bombardment）直接在水稻乳熟期穀粒進行 GUS 表現，則在縮
減到 -437 的啟動子和 GUS 形成嵌合基因有較高的 GUS 活性表現
，-1046 和 -292 的表現居中，而 -664 的 GUS 表現最低。這結果可能
顯示 RP3 啟動子的調節，可能有 postive（-1046∼-664，-437∼-292）
和 negative（-664∼-437） 的調節因子存在。此 negative regulatory
element 可能有很強的抑制效果，而使 -1046 bpRP3 promoter 在轉殖菸
草表現並不強。 利用轉殖菸草懸浮細胞為材料，懸浮細胞的生長和GUS
活性在不同的 lines 之間有不 同的活性，如 line 2 GUS 活性隨細胞生
長 GUS活性下降，line 7 GUS 活性則 先下降後 上升， line 18 隨細胞
生長而上升，但 GUS活性還是以 line 2 最強，顯示出 line 2 的 懸浮
細胞生理和 lines 7, 18並不相同。進行 RP3 啟動子對外來因子的影結
果顯示，若外 加 2.4-D 則會影響懸浮細胞GUS 活性的表現，使 GUS 活
性降低，所以 2.4-D 可能會抑制 懸浮細胞內 GUS活性的表現。若等體積
混合含或不含 nitrogen 之新鮮培養基，則顯示加 nirtogen 有增加GUS
活性的趨勢。以等體積混合含或不含 KH2PO4 之新鮮培養基，則 KH2PO4
並不影響 GUS活性的表現。由此可知 RP3 promter 可能會受荷爾蒙或外
來因子如 nitrogen的影響，但影響的程度並不會太大。 由 pJM3（
pBluescriptIIKS(-)+ RP3 structuregene） 的質體經定序顯示出，RP3
structure gene 含有兩個 ochre stop codonin-frame， 第一個出現在
303 bp，第二個 則出現在 450 bp 的位置，若以 pGEX-3X蛋白質表現載
體表現 RP3 gene，此嵌合基因在 Ecoli（JM109）大量表現蛋白質，所產
生的 prolamin 蛋白質分子量約 10 kDa 左右，所以經推算應停在第一個
stop codon, 而產生約 101 個胺基酸。若 RP5, RP6 的基因則和產生
約158 個較大的胺基酸 prolamin 蛋白質所以並沒有 in-frame 的存在。
利用水稻的抗體進行westren blotting 的實驗在水稻胚乳內也會有較低
分子量約 10 kDa 的 prolamin 蛋白質 表現。英文摘要 A rice
prolamin gene RP3 w
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