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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:陳信如
研究生(外文):Chen, shin ru
論文名稱:家塵滿過敏原五之結構分析
論文名稱(外文):Structural Analysis of Der p 5 Mite Allergen
指導教授:廖淑惠廖淑惠引用關係
指導教授(外文):Liaw Shwu-huey
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:分子醫學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1997
畢業學年度:85
語文別:中文
論文頁數:70
中文關鍵詞:家塵滿過敏原
外文關鍵詞:miteallergen
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家塵滿已被深入研究且被認為是主要的室內過敏原,是引起氣喘,過敏性鼻
炎,異位性皮膚炎...等過敏性疾病的重要因子.在全球多見的滿種中,
Dermatophagoiddes pteronyssinus(Dp)是台灣最猖獗的種類.依據Lin等
人自Dp基因庫選殖到第五組過敏原Der p 5)基因,可表現一由132個胺基酸
構成的蛋白質:N端的19個胺基酸構成導引片段(leader peptide),其餘113
個胺基酸則為成熟蛋白(mature protein).利用重組DNA技術可得到115個
胺基酸的重組蛋白質(Lin et al., 1994).本論文是針對Dp第五組過敏原(
Der p 5)結構進行分析研究.首先我們利用X光繞射分析方法試圖了解Der
p 5的三級結構.我們在5% PEG6K, 1mM CaCl2,10mM (NH4)2HPO4, 0.1M
citric acid-Na2HPO4 (pH 3.4), 22C的條件下得到八面體型的晶體.此晶
體屬於tetragonal晶系,X光繞射點的分辨率為3A,空間群屬於p41212或
p43212,晶胞大小為a=b=113.5A, c=234.5A .由self rotation以及計算晶
體中溶液含量得知一個晶胞中有96的單分子聚集.另一方面,經由分子濾篩
柱層析,穿透式電子顯微鏡,光子散聚等實驗意外發現:在中性的環境,Der
p 5是以單分子的型態存在,在酸性條件下則是形成纖毛狀型態.此外我們
利用圓二色光譜得知Der p 5是一helical蛋白.藉由PAIRCOIL, COILS電腦
軟體,預測Der p 5 C端胺基酸序列有極高的可能性形成coiled coil的結
構.再者,Der p 5的胺基酸序列有23%是帶正電荷的胺基酸殘基,26%是帶負
電荷的胺基酸殘基.這些因素可能促使Der p 5有集結的現象.最後由於
coiled-coil a-helix被認為是能引起免疫反應的特殊結構,並進一步分析
其它家塵滿過敏原的胺基酸序列.發現一些非酵素性質的過敏原(Der p
2,Der p 7, Der f 2, Mag 29....)皆具有4,3-hydrophobic repeat.因此
我們認為這些過敏原可能會形成coiled coil的結構,在引起免疫反應上扮
著重要角色.
The most significant indoor allergens are those of the house
dust miteswhich play a major role in the induction of asthma,
allergic rhinitisand allergic dermatitis. The predominant mite
species in Taiwan isDermatophagoides pteronyssinus. The past
finding suggested that the cDNAclone encoding Der p 5 allergen
produced a 132-residue polypeptide which has a putative
19-residue leader peptide and a 113-residue mature protein(Lin
et al., 1994). Here we report our structural studies of Der p 5
which is composed of 115-residue by recombinant DNA technology.
First, X-ray crystallography is used to explore the three-
dimensional structure of Der p 5. The large octahedral crystal
were obtained at areservoir solution with 5% PEG6K, 1mM CaCl2,
10 mM(NH4)2HPO4, and 0.1 M citric acid-Na2Hpo4 (pH 3.4), at 22
C. The crystal diffract 3A resolution, belong to the tetragonal
space group, P41212 or P43212. The cell dimensiona=b=113.5A,
c=234.3A. By self rotation function analysis, there are
significant2-, 3-, and 4-fold noncrystallographic axes in the
asymmetric unit and thenit suggested there are 96monomers in a
unit cell. Furthermore, using gel filtration chromatography,
dynamic light scattering, and electron microscope,we
surprisingly found that Der p5 is monomeric at neutral pH,
whereas it formspolymeric gilaments at low pH.Studies by
circular dichroism suggested that Der p 5 is a helical protein.
Theapplication of NEWCOLL and COILS programs predicted the C-
terminal residues ofDer p 5 as a coiled-coil a-helix. In
addition, the high content of chargedamino acid residues of Der
p 5, 23% negatives and 20% positive, implied that the
electrostatic interactions play a key role in protein
aggregation. Finally,the other allergrns form dust mite are also
analysises because it is believed that the coiled-coil a-helix a
is a high immunogenic structure motif. Besides Der p 5, some
non-enzymatic allergens (eg. Der p 2, Der p 7, Der f 2, Mag
29)contain the 4,3-hydrophobic repeat which could potential form
coiled-coils.Therefore the a-helical coiled=coils of these
allergens may play key roles in their immunogenicity.
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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