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研究生:廖建清
研究生(外文):Liau, Jian-Ching
論文名稱:黑黴菌屬beta-葡萄醣甘酵素之轉移合成與酵素固定化之研究
論文名稱(外文):Studies of transglucosylation synthesis and enzyme immobilized of Aspergillus niger beta-glucosidase
指導教授:顏聰榮顏聰榮引用關係
指導教授(外文):Tsong-Rong Yan
學位類別:碩士
校院名稱:大同工學院
系所名稱:化學工程學系
學門:工程學門
學類:化學工程學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1997
畢業學年度:85
語文別:中文
論文頁數:86
中文關鍵詞:黑黴菌醣甘酵素醣轉移烷基葡萄醣甘纖維寡醣固定化
外文關鍵詞:Aspergillus nigerglycosidasestransglycosylationalkyl-glucosidescello-oligosaccharidesimmobilized
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寡醣類及烷基醣甘等醣甘類衍生物對生物生理機能之研究越來越多,也
越發現其重要性,因此在各領域之應用需求也不斷增加。利用醣類酵素
可以特異性催化合成寡醣類及其衍生物,本實驗室於Aspergillus niger
培養液中純化出之b-glucosidaseII穩定性高,且有高轉移活性。本研究
利用該酵素之轉移性質探討合成烷基葡萄醣甘(alkyl-glucosides)和纖維
寡醣(cello-oligosaccharides)之最適條件,為提高酵素之利用率,同時
探討酵素之最適固定化條件及固定化後酵素之性質。 b-glucosidaseII
在室溫下可保存長達六個月以上。酵素於20% methanol存在下活性提
高80%,最適溫度和溫度穩定度都由60oC降至50oC。b-glucosidaseII在50
℃下24小時之內可維持溫度穩定,考慮methanol對酵素穩定性之影響,將
反應溫度固定在40℃。在30% methanol和ethanol存在下,分別與2%
cellobiose進行轉移反應6 hr後,分別有83% methyl-glucoside和55%
ethyl-glucoside產生。以15% cellobiose為基質進行轉移反應6hr後,有
超過30% trisaccharide和gentiobiose轉移產物。分析cellobiose、
methyl-glucoside和gentiobiose之KM和kcat知酵素對其水解能力為
gentiobiose > cellobiose > methyl-glucoside,透過轉移反應中
glucose之添加和對水解pNP-cellobioside產物之分析,推測酵素催化轉
移反應之機制。 利用比活性140U/mg之部分純化b-glucosidaseII,以3%
alginate對15U/mL酵素做包埋固定,有最高固定量1.6U/g-bead,固定效
率為9%。以chitopearl為固定載體之共價固定法,使用15U酵素及2.5%
glutaraldehyde活化條件下可達最高固定活性55U/g-bead,和36% 之固定
效率。將酵素與chitopearl bead吸附後之enzyme-chitopearl complex以
glutar-aldehyde (1.5%) 做交聯處理後,酵素之穩定性有明顯提昇。固
定化後酵素之最適反應溫度由60℃上升至65℃。free酵素在55℃、60℃
和65℃下之半生期為35hr、2.3hr和0.33hr,固定化後則延長為125hr
、33.5hr和5.4hr。固定化後酵素之最適pH值均略微向下偏移,固定化前
酵素pH穩定度在pH4.0-5.5,以chitopearl固定後在pH3.0-8.8之間皆可保
持80%以上活性之穩定。

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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