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摘要 本研究主要以同時含有酵素D-Hydantoinase及amidohydrolase之菌體 DH101來進行D,L-對-氫氧苯基乙內醯尿(D,L-p-hydroxyphenyl- hydantoin)之水解反應,生產抗生素前驅物D-對-氫氧苯基胺基乙酸(D- p-hydroxyphenylglycine)。實驗主要分成兩個部分,第一部份是針對菌 體活性的研究,包含菌體細胞及酵素amidohydrolase的活性分析;第二個 部分主要針對包覆菌體之褐藻膠固定化系統,添加PEI及戊二醛加以改良 。 針對菌體細胞活性的研究結果,發現中間產物N-cabamoyl-D- hydroxyphenylglycine較不易透過細胞膜;以酵素粗液進行酵素 amidohydrolase活性分析,得到動力學常數(pH 8.0、40℃)之Km值 為2.09(10-3 M,Vmax為 18.55 unit/g protein;當pH值= 7.5時有最佳 活性。 經過機械強度分析及材質穩定度測試後,得到以下幾個結果:1.褐藻膠膠 球浸泡氯化鈣溶液的時間,30分鐘已經足夠;2.添加PEI於固化液中,可 以穩定膠球內部分子結構,在Shaker中的穩定度達120個小時,但是機械 強度較弱;3.浸泡戊二醛可以在PEI及菌體間產生交聯,機械強度最佳, 但易使菌體失活;4.將膠球粒徑改為1.0mm後,固化液中添加PEI之膠球可 以在400rpm下,連續攪拌120個小時。 最後 使用材質改良過之膠球進行長期批次及固定床反應。
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