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研究生:蔡女滿
論文名稱:人類肝癌細胞株中瑞粒酉每活性與細胞週期調節因子之表現情形
論文名稱(外文):Expression of Telomerase Activity and Regulators Dependent on Cell Cycle Modulation in Hepatocellularcarcinoma Cell Lines (HCC)
指導教授:李偉華李偉華引用關係韓鴻志
學位類別:碩士
校院名稱:國防醫學院
系所名稱:病理及寄生蟲學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1999
畢業學年度:87
語文別:中文
論文頁數:118
中文關鍵詞:端粒酉每細胞週期肝細胞癌細胞株西方點墨法調控因子
外文關鍵詞:Telomerasecell cycleHepatocellular carcinoma cell linesWestern blotregulatorscyclin AKi-67
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  端粒酉每是一種作用於DNA端粒的核醣核酸蛋白,能將染色體縮短之DNA端粒序列補齊使細胞不會老化(senescence),它存在於許多的惡性腫瘤細胞上,而卻罕見於正常體細胞內。當細胞進行分化靜止時期端粒□活性會降低,但於細胞週期不停運轉之細胞上,其活性會增高。已知端粒□及端粒涵蓋了控制細胞增生及細胞老化之調節與惡性細胞中無限制增生的能力。部份之細胞週期調控因子之不正常表現使整個細胞週期失去調節,最後演化為惡性腫瘤(癌症產生)。本文利用化學藥物有MTX,Thymidine,Doxorubicin,Nocodazole,5-FU等分別將細胞同步化於G1,G1/S,G2/M,M週期,並利用TRAP分析端粒□活性。實驗結果發現,在肝癌細胞株中,其細胞週期之運轉與其他細胞株有明顯不同,且其端粒□活性於四個週期皆有表現,又以M週期表現量最高。同時也利用,酵素連結免疫吸附分析(ELISA),西方點墨法(Western blot),細胞免疫化學染色法(Immunocytochemical stain),去分析細胞週期調控因子之表現量與端粒□活性之相關性。結果發現,端粒□活性於M週期活性最高時,Ki-67之表現量同時也最高呈一正向關係,而cyclin A之表現量卻明顯降低呈一負向關係,然而與其他細胞週期調控因子之表現量皆無直接之關聯性,猜測與這些調控因子其本身之功能較有關(非量之表現而是質之表現)。綜合實驗結果,我們認為肝癌細胞株之細胞週期運行有其專有之特性,尤其在M週期,端粒□扮演著一重要之角色。  瑞粒□是一種作用於DNA端粒的核醣核酸蛋白,能將染色體縮短之DNA端粒序列補齊使細胞不會老化(senescence),它存在於許多的惡性腫瘤細胞上,而卻罕見於正常體細胞內。當細胞進行分化靜止時期端粒□活性會降低,但於細胞週期不停運轉之細胞上,其活性會增高。已知端粒□及端粒涵蓋了控制細胞增生及細胞老化之調節與惡性細胞中無限制增生的能力。部份之細胞週期調控因子之不正常表現使整個細胞週期失去調節,最後演化為惡性腫瘤(癌症產生)。本文利用化學藥物有MTX,Thymidine,Doxorubicin,Nocodazole,5-FU等分別將細胞同步化於G1,G1/S,G2/M,M週期,並利用TRAP分析端粒□活性。實驗結果發現,在肝癌細胞株中,其細胞週期之運轉與其他細胞株有明顯不同,且其端粒□活性於四個週期皆有表現,又以M週期表現量最高。同時也利用,酵素連結免疫吸附分析(ELISA),西方點墨法(Western blot),細胞免疫化學染色法(Immunocytochemical stain),去分析細胞週期調控因子之表現量與端粒□活性之相關性。結果發現,端粒□活性於M週期活性最高時,Ki-67之表現量同時也最高呈一正向關係,而cyclin A之表現量卻明顯降低呈一負向關係,然而與其他細胞週期調控因子之表現量皆無直接之關聯性,猜測與這些調控因子其本身之功能較有關(非量之表現而是質之表現)。綜合實驗結果,我們認為肝癌細胞株之細胞週期運行有其專有之特性,尤其在M週期,端粒□扮演著一重要之角色。
  Telomerase, a ribonucleoprotein, compensates for the continued shortening telomere length by adding hexameric (TTAGGG) repeat to the telomeric ends of the chromosomes. Telomerase activity is expressed in almost all malignant tumors, but is rarely detected in normal somatic cells. Activity is high in the actively cycling culture and low in the quiescent differentiated cells. Telomerase and telomeres have been shown to be involved in the control of cell proliferation, the regulation of cell senescence and the unlimited proliferation capacity of malignant cells. Deregulation of the cell cycle by abnormal expression of same cell cycle regulatory proteins is a common finding in malignant and might be a prerequisite for cancer development. In Hepatocellularcarcinoma (HCC) cell lines, cell cynchronized at G1; G1/S; G2/M; M and G1/S phase by MTX; Thymidine; Doxorubicin; Nocodazole and 5-FU chemical agents, and detected the telomerase activity by TRAP assay. The results showed that the cell cycle transition was different the other cell lines, and could detect the telomerase activity in all cell cycles but the highest in M phase. We also investigated the expression of cell cycle regulators by ELISA, Western blot, Immunocytochemical stain and correlation with the telomerase activity. The experimental data showed that increased the amount of Ki-67 expression in M phase that increasing the correlation with telomerase activity, but decreased the amount of cyclin A expression in the same phase that presented a descending trend. The amounts of other cell cycle regulators expression were no different in whole cell cycles, but they changed the localization in cell cycles. So, they might be correlation with their function. In conclusion, strong telomerase activity in M phase of cell cycle was cell line specifically in HCC cell lines.
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