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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:王學偉
論文名稱:D型肝炎病毒RNA包裹機制之探討及重要序列之
論文名稱(外文):Mechanism for HDV genome packaging and
指導教授:陳培哲陳培哲引用關係
指導教授(外文):Liang, Cheng
學位類別:博士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:微生物學研究所
學門:生命科學學門
學類:微生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:1998
畢業學年度:87
語文別:中文
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封面
中文摘要
英文摘要
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第一章 導論
第一節、D型肝炎病毒的發現、地位、及結構
第二節、D型肝炎病毒的RNA
第三節、Delta抗原
第四節、D型肝炎病毒的生活史及複製模式
第二章 D型肝炎病毒RNA包裏機制之探討
一、前言
第一節、以往有關D型肝炎病毒組合的研究,以及尚待解決的問題
第二節、實驗設計
二、材料與方法
一、由實驗室同仁提供之質體
二、質體的構築
三、勝任細胞之製備
四、質體轉形
五、重組質體的快速篩選
六、質體的小量製備
七、DNA序列分析
八、質體的大量製備
九、DNA轉染
十、細胞培養液中病毒粒的收集
十一、以CsCl密度階梯分析病毒顆粒密度
十二、西方墨點分析法
十三、細胞中RNA的抽取
十四、北方雜交分析法
十五、收射性RNA探針之製備
三、結果
一、質體pCDm2G能在HuH-7肝癌細胞株中表現單套的基因體RNA
二、四質體共同轉染系統可以成功地把D型肝炎病毒RNA包裏出來,且大型delta抗原單獨存在時就可以帶出DD型肝炎病毒RNA
三、利用Isopycnic離心分析法盤鑑定病毒顆粒中的病毒RNA及delta抗原
四、大型 delta抗原的RNA結合區域對RNA的包裏是必須的
五、小型delta抗原可以假進D型肝炎病毒RNA之包裏
六、D型肝炎病毒RNA的包裏亦可經由直接結合到小型delta抗原的RNA結合區域上而達成
七、小型delta抗原上的RNA堂合區域對其加強病毒RNA包裏的能力是必須的,而且這種RNA包裏增強的現象只有在小型Vdelta抗原也被包裏進入病毒顆粒的時候才會發生
八、病毒複製與病毒RNA包裏增加的現象是無關的
四、討論
一、四質體共同轉染系統的建立
二、大型delta抗原在包裏RNA時所需要的功能區,組合模式,以及所扮演的角色
三、小型delta抗原D型肝炎病毒RNA的包裏:可能機制的探討
四、Coiled-coil區域突變的小型delta抗原仍保留了互相結合的能力
第三章 d型肝炎病毒RNA上重要序列之鑑定
一、前言
第一節 以往有關D型肝炎病毒基因體RNA包裏訊息的研究
第二節 D型肝炎病毒的轉錄
第三節 實驗設計
二、材料與方法
一、質體的構築
二、核酸序列的自動定序
三、RNA二級結構之分析
四、細胞株H7-SHDAg的建立
五、反轉錄反應
六、聚合鏈反應
七、RT-PCR產生序列的分析
八、polyA+RNA的純化
九、D型肝炎病毒RNA的大量製備
十、RNA轉染
十一、RNA分解保護分析法
三、結果
一、大多數的變異型D型肝炎病毒RNA仍可進行自我剪接反應而產生1.7KB的單套體,並且這些單套體RNA的穩定性亦相似
二、單套體變異型病毒RNA仍可被包裏進入病毒顆粒中釋放出來
三、D型肝炎病毒基因體RNA上多數的位置對於其複製都是必須的
四、病毒基因體RNA及反基因體RNA複製所需的ciselements不同
五、D型肝炎病毒cDNA上一連續區對於病毒mRNA的產生是重要的
六、以RNA轉染實驗確認以上所有的實驗結果
(1) RNA轉染實驗系統的建立
(2) RNA轉染實驗的實驗堂果
七、以RNase Protection Assay偵測D型肝炎病毒mRNA並定其5"端起點
八、XbaI RNA經轉染後序列發生改變
四、討論
一、D型肝炎病毒的RNA包裏訊息
二、D型肝炎病毒RNA複製所需的cis-elements
三、轉錄mRNA需要的cis-element-可和複製所需要的cis-element區分開來
四、轉染RNA序列的變動
第四章 綜合討論及展望
第一節 本實驗對D型肝炎病Virolory的貢獻
第二節 D型肝炎病毒與viroid、virusoid及、satelliteRNA的關係,以及實結果對這些病原體的意義
第三節 本實驗對其他RNA病毒的意義
第四節 未來實驗方向與展望
圖表
參考文獻
附錄:與本論文相關之已發表論文
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