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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:賴儀瑾
研究生(外文):Yi-Chin Lai
論文名稱:霍香薊黃脈病毒屏東株系之AV1蛋白與外鞘蛋白及基因體DNA間交互作用之研究
論文名稱(外文):Molecular Interactions among the AV1 Protein, Coat Protein and Genomic DNA of Ageratum Yellow Vein Virus Ping-Tung Strain
指導教授:胡仲祺
指導教授(外文):Chung-Chi Hu
學位類別:碩士
校院名稱:國立中興大學
系所名稱:農業生物科技學研究所
學門:農業科學學門
學類:農業技術學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2002
畢業學年度:90
語文別:中文
中文關鍵詞:霍香薊黃脈病毒
外文關鍵詞:Ageratum Yellow Vein Virus
相關次數:
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豆類金黃嵌紋病毒屬之病毒為由粉蝨傳播,感染雙子葉植物之雙生病毒,是熱帶及亞熱帶地區之主要植物病毒。豆類金黃嵌紋病毒屬之病毒顆粒為雙球型,內含一條或二條環狀單鏈DNA。本實驗的主要研究材料,霍香薊黃脈病毒屏東株系 (AYVV-PT),即為僅含單基因體之豆類金黃嵌紋病毒屬病毒。在單基因體的豆類金黃嵌紋病毒中,AV1蛋白可能具有類似移動蛋白之功能,與病毒在植物中之移動有關。故本研究之目的即為研究AYVV-PT之AV1蛋白與外鞘蛋白及基因體DNA間之交互作用。首先先將AV1基因構築於pET21d載體上,利用細菌E. coli表現以製作血清,並以西方墨點法及核酸蛋白結合-酵素連結免疫分析法 (NB-ELISA) 進行研究。經V8蛋白質酶作用後發現AV1蛋白在生體外可能是以聚合體的形式存在,而由西方墨點法也證實AV1蛋白可能以聚合體形式存在於植物體中。利用西方墨點法及蛋白質覆蓋法 (protein overlay) 顯示AV1蛋白可以與病毒之外鞘蛋白於生體外發生交互作用。而應用NB-ELISA方法,發現AV1蛋白在不同鹽類濃度的條件下皆可與病毒之單股與雙股DNA發生交互作用,且此交互作用不具有專一性。藉由NB-ELISA之實驗,推論AV1蛋白比較可能先與基因體DNA結合後再與外鞘蛋白結合。因此,本研究以生體外交互作用之實驗證實AV1蛋白具有類似BV1,BC1等已知移動蛋白之特性,而可幫助單基因體豆類金黃嵌紋病毒進行細胞至細胞間之移動。
Most of the members of the family Geminiviridae belong to the genus Begomovirus, which are transmitted by whitefly to dicotyledonous plants and cause severe damage to crop plants. The begomoviruses are characterized by twinned isometric particles with a genome consisting of one or two circular single-stranded DNA. In the monopartite begomoviruses lacking DNA B, which encodes for movement related proteins, the AV1 protein is speculated to be involved in viral movement. The purpose of this study is to analyze the interactions between the AV1 protein, coat protein and genomic DNAs of a monopartite begomovirus, ageratum yellow vein virus Ping-Tung strain (AYVV-PT). The AV1 gene of AYVV-PT was cloned into plasmid pET21d and expressed in E. coli. The AV1 proteins were purified and subjected to the production of specific antiserum. In vitro, the AV1 protein could self-interact to form oligomers, as suggested by V8 protease digestion analysis. The existence of oligomeric forms of AV1 protein in plants was revealed by Western blot. The result of Western blot and protein overlay analyses demonstrated that AV1 protein could interact with the coat protein of AYVV-PT. The in vitro interaction between AV1 protein and both single- and double-stranded viral DNAs were detected by using nucleoprotein binding-enzyme linked immunosorbant assay (NB-ELISA) in different salt concentrations. However, the interactions appeared to be non-specific. The order of binding among the AV1 protein, coat protein, and viral DNA was also investigated by NB-ELISA, which showed that the AV1 protein might interact with the viral nucleic acids first. These results indicated that AV1 protein of monopartite begomoviruses might have the functions similar to BC1 and BV1 proteins of the bipartite begomoviruses, which may facilitate the movement of the monopartite begomoviruses by interacting with viral coat protein and DNAs.
中文摘要 -------------------------------------------------- 1.
英文摘要 -------------------------------------------------- 2.
壹、 前言 --------------------------------------------- 3.
貳、 前人研究 ----------------------------------------- 5.
一、經濟重要性 -------------------------------------------- 5.
二、雙生病毒簡介 ------------------------------------------ 7.
參、 材料與方法 -------------------------------------- 14.
一、試驗材料 --------------------------------------------- 14.
二、試驗方法 --------------------------------------------- 14.
1. AV1基因選殖 ------------------------------------------- 14.
2. 在大腸桿菌表現系統中誘導AV1蛋白大量表現 --------------- 17.
3. 利用V8蛋白質酶分析AV1蛋白是否會形成聚合體 ------------- 19.
4. 從植物體中偵測AV1蛋白 --------------------------------- 20.
5. 製備單股及雙股DNA探針 --------------------------------- 21.
6. 利用蛋白質覆蓋法及西方墨點法分析AV1蛋白與外鞘蛋白間之交互作用 ------------------------------------------------------- 24.
7. 利用酵素連結免疫分析法分析AV1蛋白與外鞘蛋白間之交互作用 25.
8. 利用核酸蛋白結合-酵素連結免疫分析法分析單股及雙股DNA與AV1蛋白間之交互作用 --------------------------------------------- 25.
肆、 結果 -------------------------------------------- 27.
一、 利用細菌表現AYVV-PT之AV1基因 -------------------- 27.
二、 產生抗AYVV-PT AV1蛋白之抗體 --------------------- 28.
三、 AYVV-PT AV1蛋白在生體外可能以聚合體的形式存在 --- 28.
四、 從植物中偵測AV1蛋白 ----------------------------- 29.
五、 AYVV-PT AV1蛋白與外鞘蛋白間之交互作用 ----------- 29.
六、 AYVV-PT AV1蛋白與單股或雙股DNA間之交互作用 ------ 30.
七、 AYVV-PT AV1蛋白與外鞘蛋白及基因體DNA之間結合的關係 30.
伍、 討論 -------------------------------------------- 32.
陸、 參考文獻 ---------------------------------------- 35.
圖 ------------------------------------------------------- 46.
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