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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:柯英潔
論文名稱:奈米科技於醫學檢驗之應用:發展快速單一步驟免疫層析法檢測蝦白斑病毒之研究
論文名稱(外文):Application of nanotechnology in medical diagnosis:development of a rapid one-step immunochromatographic assay for detecting white spot syndrome virus (WSSV) in shrimps
指導教授:毛仁淡
學位類別:碩士
校院名稱:國立交通大學
系所名稱:生物科技研究所
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2002
畢業學年度:90
語文別:中文
中文關鍵詞:白斑病毒免疫層析法
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白斑病毒 (White Spot Syndrome Virus, WSSV) 是目前危害養殖蝦類之主要病原體。1992年於台灣首度被鑑別,其分布範圍不僅在亞洲,而是全世界。此病症特徵在於甲殼、附屬物和組織內面有明顯白斑,傳播容易且致死率高,對產業經濟方面影響甚鉅。為了有效控制病毒散佈,偵測已被WSSV輕微感染之潛在帶原者是極為重要之研究。PCR是最為大眾採用之檢驗方式,敏感度高,但花費不貲且需專人操作。故發展更快速方便檢測病毒之技術是刻不容緩。
本實驗利用WSSV之抗體,經西方墨點法 (Western blot) 和聚合酵素鏈擴增反應 (PCR) 確認,證實此抗體會辨識白斑病毒。將血清中免疫球蛋白G (IgG) 以高效能液相層析 (HPLC) 陰離子交換樹脂 (DEAE column) 分離純化,與實驗合成之奈米金顆粒 (gold nanoparticles) 相結合形成免疫金膠(immunogold),應用於快速單一步驟之免疫層析法(immunochromatographic assay)。以白斑病毒蝦組織萃取液當作正控制組。此技術十分敏感,可特異性偵測在肌肉、足、內臟及甲殼中之白斑病毒。相反地,偵測病毒蝦組織時,未免疫血清中免疫球蛋白G (non-immuned IgG)不會產生偽陽性結果。使用本實驗發展出的免疫金膠技術,不僅加快檢驗速度,且不需操作試藥及儀器,適合蝦農於池邊檢測,第一時間發現並採取處理,避免災情擴大。
第一章 前言
1.1奈米科技
1.2背景
1.3白斑病毒簡介
1.4白斑病毒之診斷方式
1.5研究目的
1.6膠體金 (colloidal gold)
1.7免疫金膠
1.8免疫層析法
第二章 材料與方法
2.1單株抗體之製作
2.1.1免疫動物
2.1.2骨髓癌細胞 (myeloma cell)
2.1.3細胞融合
2.1.4細胞增殖及取樣篩檢
2.1.5融合細胞之單株化 (subclone)
2.1.6單株抗體之生產
2.1.7培養液及試劑
2.2白斑病毒抗體的測定與確認
2.2.1 ELISA
2.2.2 SDS-PAGE
2.2.3西方轉漬法
2.2.4檢體基因體DNA萃取
2.2.5蝦白斑病毒聚合酵素鏈擴增反應
2.3應用白斑病毒抗體於免疫層析法
2.3.1製備金膠 (colloidal gold)
2.3.2分析金膠之特性
2.3.2.1拍攝製備金膠過程之顏色變化,分析金膠特性
2.3.2.2利用穿透式電子顯微鏡 (Transmission Electron Microscope, TEM) 分析金膠粒徑
2.3.2.3利用分光光度計 (spectrophotometer) 分析金膠特性
2.3.3用高效能液相層析 ( high performance liquid chromatography, HPLC) 分離純化兔子血清中免疫球蛋白G (IgG)
2.3.4製備免疫金膠 (immunogold)
2.3.5製備免疫層析法所使用之測試片
2.3.6應用檢驗試紙至病毒檢測
2.3.7製備好之免疫金膠針對不同病毒蝦組織萃取液之反應強度
第三章 結果與討論
3.1單株抗體之製作
3.2白斑病毒抗體的測定與確認
3.3應用白斑病毒抗體於免疫層析法
3.3.1免疫層析法原理
3.3.2金膠之製造及特性分析
3.3.3免疫球蛋白G純化
3.3.4免疫層析法之應用
3.4聚合酵素鏈擴增反應、西方墨點法及免疫層析法之比較
第四章 結論
第五章 參考文獻
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