跳到主要內容

臺灣博碩士論文加值系統

(3.239.4.127) 您好!臺灣時間:2022/08/20 07:35
字體大小: 字級放大   字級縮小   預設字形  
回查詢結果 :::

詳目顯示

: 
twitterline
研究生:陳明注
研究生(外文):Ming-Chu Chen
論文名稱:以磷酸緩衝溶液清除大白鼠呼吸上皮黏液層之研究
論文名稱(外文):The Study of Removing Mucous Layer on The Rat Respiratory Epithelium with Phosphate Buffer Solution
指導教授:陳士賢陳士賢引用關係簡基憲簡基憲引用關係
指導教授(外文):Colin S. Chen., Ph. D.Chi-Hsien Chien., Ph. D.
學位類別:碩士
校院名稱:國立高雄師範大學
系所名稱:生物科學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2002
畢業學年度:90
語文別:中文
論文頁數:63
中文關鍵詞:掃描式電子顯微鏡呼吸上皮臨界點乾燥大白鼠
外文關鍵詞:scanning electron microscopyrespiratory tractcritical point dryingrat
相關次數:
  • 被引用被引用:0
  • 點閱點閱:205
  • 評分評分:
  • 下載下載:25
  • 收藏至我的研究室書目清單書目收藏:0
呼吸上皮纖毛形態的改變,可作為呼吸性毒性物質毒害程度的指標,但要取得沒有黏液層覆蓋的上皮標本相當困難。以掃描式電子顯微鏡觀察標本,除了掃描式電子顯微鏡本身之性能外,還要在標本製備上加以改進。
研究細胞或器官外表超微構造的先決條件,就是對標本作最適當的處理。從取樣到電子顯微鏡觀察的每一步驟,都必需極端的謹慎、正確和完善,方能獲得最佳的結果。在觀察呼吸上皮形態的研究中,對呼吸上皮的黏液層有各種不同的處理方式,標本未經沖洗處理、其組織表面黏液未加以清除則不能完整的呈現出呼吸上皮的超微構造,因此不易觀察。呼吸上皮掃描式電子顯微鏡標本製作的過程,經過固定、脫水、乾燥及鍍導電層等步驟,若操作不當、就無法觀察到標本之原貌。
本研究的目的是以磷酸緩衝溶液在低溫及連續震盪下清除呼吸道黏液並比較其清除的效果,以期定出有效的掃描式電子顯微鏡標本的製作流程。經由不同流程處理後發現,製作呼吸上皮的掃描式電子顯微鏡標本應先經由沖洗的步驟。而不同沖洗方法所得到的結果有極大的差異,比較不同的沖洗液後,發現以磷酸緩衝溶液處理可得到最理想的呼吸上皮的形態。故磷酸緩衝溶液最適宜作為掃描式電子顯微鏡標本製作過程中的沖洗液。由實驗結果可知,灌流固定後的呼吸上皮,先經磷酸緩衝溶液在低溫下沖洗,再分別經戊二醛-對甲醛、四氧化鋨固定,不同濃度的酒精脫水,液態二氧化碳臨界點乾燥後鍍金膜,可顯示出完整、清晰的纖毛及各種表面構造。

The morphological change of ciliated epithelium was applied as the indicator of toxic chemicals onto the respiratory system. Scanning electron microscopy(SEM)has been utilized to study the ultrastructural morphology of the respiratory tract such as the nasal cavities, larynx, trachea, principal bronchus, and lobar bronchus. The specimen surface observed under the SEM should be free of mucus or protein-rich body fluids, or other contamination. Thus, many techniques are developed to obtain better SEM specimens of the respiratory tract. The objective of this study is to develop a proper rinsing protocol for better SEM observation. Male rat respiratory tracts was taken and fixed with aldehyde in-situ and critical point dried. Many current treatment techniques were evaluated with the method developed in this study. It was found that with the repeated rinse of phosphate buffered solution followed by aldehyde fixation, the treatment will effectively eliminate the mucus coverage.

目次
中文摘要------------------------------------------------------------------------------------1
英文摘要------------------------------------------------------------------------------------2
第一章、前言------------------------------------------------------------------------------3
第二章、相關研究-----------------------------------------------------------------------4
一、 大白鼠的呼吸系統-----------------------------------------------------------4
二、 呼吸上皮掃描式電子顯微鏡標本製備研究的回顧----------------10
第三章、材料與方法-------------------------------------------------------------------17
一、 實驗流程--------------------------------------------------------------------17
二、 實驗動物--------------------------------------------------------------------17
三、 儀器設備--------------------------------------------------------------------17
四、 實驗藥品--------------------------------------------------------------------17
五、 實驗設計--------------------------------------------------------------------18
六、 大白鼠呼吸上皮掃描式電子顯微鏡標本製備步驟-------------19
第四章、結果與討論------------------------------------------------------------------22
一、 清除呼吸上皮的黏液層---------------------------------------------------22
二、 以掃描式電子顯微鏡觀察呼吸上皮的形態-------------------------22
三、 清洗的目的以及使用磷酸緩衝溶液沖洗標本
清除黏液層的原因---------------------------------------------------------38
第五章、結論---------------------------------------------------------------------------40
第六章、參考文獻---------------------------------------------------------------------44
第七章、附錄---------------------------------------------------------------------------47
表目錄
表4-1 呼吸上皮纖毛形態在不同清除黏液層步驟後的比較-----------------23
表5-1 掃描式電子顯微鏡標本製作流程的比較---------------------------------41
圖目錄
圖2-1 鼻腔(大白鼠頭部正中旁矢狀切面)-------------------------------------5
圖2-2 大白鼠支氣管樹的背面觀-----------------------------------------------------7
圖4-1 以磷酸緩衝溶液沖洗呼道不同部位之結果呈現-----------------------25
圖4-2 呼吸道不同部位未經沖洗步驟之結果呈現-----------------------------29
圖4-3 以生理鹽水沖洗呼吸道不同部位之結果呈現--------------------------32
圖4-4 標本以蛋白脢溶液泡浸4小時之結果呈現-----------------------------35
圖4-5 標本以蛋白脢溶液泡浸2小時之結果呈現-----------------------------37
圖5-1 掃描式電子顯微鏡用標本之製備法比較--------------------------------43

1. 林良平。2000年。低真空掃描電子顯微鏡在微藻細胞觀察上之應用。科儀新知21卷4期。14-21頁。
2. 陳家全,李家維,楊瑞森。1991年。生物醫學電子顯微鏡技術。新竹市: 國科會精儀中心,288頁。
3. Alexander, I., Ritchie, B. C., Maloney, J. E., and Hunter, C. R. 1975 Epithelial surfaces of the trachea and principal bronchi in the rat. Thorax, 30:171-177
4. Andrews, P. 1981 Characteristic surface topographics of cells lining the respiratory tract. Biomedical research 2, supplement 281-288.
5. Andrews , P. M. 1974 A scanning electron microscopic study of the extrapulmonary respiratory tract. Am. J. Anat, 139:399-424.
6. Bozzola, J. J., and Russell, L. D. 1992 Electron microscopy :principles and techniques for biologists, Jones and Bartlett Publishers, Boston.
7. Essa, H. A., and.Mary, M. B. 1985 Effect of atmospheric ammonia on the surface ultrastructure of the lung and trachea of broiler chicks. Poult. Sci, 64:2056-2061.
8. Fujita, T., Tanaka, K., and Tokunaga, J. 1981 SEM atlas of cells and tissues, Igaku-shoin Publisher, Tokyo.
9. Hebel, R ., and Stromberg, M. W. 1986 Anatomy and embryology of the laboratory rat. BoMed Verlag Wörthsee Pub.
10. Lange, R. W., Lantz, R. C., Stolz, D. B., Watkins, S. C., Sundareshan, P., Lemus , R., and Karol, M. H. 1999 Toluene diisocyanate colocalized with tubulin on cilia of differentiated human airway epithelial cells. Toxicol. Sci, 50:64-71.
11. Monteiro-Riviere, N. A., and Popp, A. J. 1984 Ultrastructural characterization of the nasal respiratory epithelium in the rat, Am. J. Anat, 169:31-43.
12. Murakami, T. 1974 A revised tannin-osmium method for non-coated scanning electron microscope specimens. Arch. Histol. Jap, 36:189-193.
13. Nagaraja, K. V. 1983 Scanning electron microscopic studies of adverse effects of ammonia on tracheal tissues of turkeys, Am J Vet Res, 44:1530-6 .
14. Peao, M. N., Aguas, A. P., de Sa, C. M., and Grande, N. R. 1993 Anatomy of clara cell secretion : surface changes observed by scanning electron microscopy. J. Anat, 183:377-88.
15. Smith, M. N., Greenberg, S. D., and Spjut, H. J. 1979 The Clara cell: A comparative ultrastructual study in mammals. Amer. J. Anat, 155:15-30.
16. Smith, G. 1977 Structure of the normal rat larynx. Lab. Anim. 11:223-228.
17. Souma, T. 1987 The distribution and surface ultrastructure of airway epithelial cells in the rat lung : A scanning electrron microscopic study. Arch. Histol. Jap, 50:419-436.
18. Spicer, S. S., Mochozuki, M. E., and Setser, M. 1980 Complex carbohydrates of rat tracheobronchial surface epithelium visualized ultrastructurally. Am. J. Anat. 158:93-109.
19. Wen, H. J., Chien, C. H., and Shen, C. L. 1991 Effect of Formalin vapour on the respiratory epithelium:A scanning electron microscopic study. Chinese Bioscience, 34(2):1-9.
20. Widdicombe, J. H., Chen, L. L., Sporer, H., Choi, H. K., Pecson, I. S., and Bastacky, S.J. 2001 Distribution of tracheal and laryngeal mucous glands in some rodents and the rabbit, J. Anat, 198:207-21.

QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
第一頁 上一頁 下一頁 最後一頁 top
無相關論文
 
1. 1. 林良平。2000年。低真空掃描電子顯微鏡在微藻細胞觀察上之應用。科儀新知21卷4期。14-21頁。
2. 王自揚,「柯林頓政府外貿政策之探討」,美國月刊,第8卷第12期,民國80年12月
3. 王中元,「中共加入WTO談判策略之分析」,共黨問題研究,第27卷第5期,90年5月
4. 王高成,「柯林頓的中共經貿政策」,美歐月刊,第11卷第2期,民國85年2月
5. 左原,「美國新貿易政策」,美歐月刊,第11卷第5期,民國85年5月
6. 左原,「中共加入WTO的基本分析」,美歐季刊,第12卷第1期,民國86年春季號
7. 李瓊莉,「美國對我加入關貿總協之觀點」,美歐月刊,第9卷第8期,民國83年8月
8. 吳玲君,「從美國三不分析台北對華府的外交策略」,問題與研究,第38卷第4期,民國88年4月
9. 林永樂,「美國國會與貿易政策」,美國月刊,第5卷第9期,民國80年1月
10. 卓慧菀,「台灣WTO入會案與兩岸關係」,理論與政策,第14卷第4期,民國89年12月
11. 周煦,「新世紀中(共)美關係」,國際關係學報,政治大學外交系,民國89年12月期
12. 周志龍,「兩岸三通、全球化與台灣經濟圈的再結構想像」,理論與政策,第14卷第4期,民國89年12月
13. 周育仁,「美國新保護主義興起之背景」,美國月刊,第5卷第10期,民國80年2月
14. 洪朝輝,「全球化-跨世紀的顯學」,問題與研究,第39卷第8期,民國89年8月
15. 高長,「WTO因素對台商赴大陸投資的影響」,國家政策論壇,第1卷第10期,民國90年12月