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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:謝欣芸
研究生(外文):Shieh, Shin-Yun
論文名稱:蝴蝶蘭ACTINcDNA之選殖及基因表現分析
論文名稱(外文):Cloning and expression analysis of ACTIN cDNA in Phalaenopsis
指導教授:陳福旗陳福旗引用關係
指導教授(外文):Chen, Fure-Chyi
學位類別:碩士
校院名稱:國立屏東科技大學
系所名稱:熱帶農業研究所
學門:農業科學學門
學類:一般農業學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2002
畢業學年度:90
語文別:中文
論文頁數:73
中文關鍵詞:ACTIN肌動蛋白蝴蝶蘭
外文關鍵詞:ACTINPhalaenopsis
相關次數:
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自蝴蝶蘭 Tropican Lady 花朵選殖肌動蛋白 ACTIN (ACT) 基因,探討 ACT 在蝴蝶蘭雜交種 Tropican Lady 之基因表現及拷貝數。依蝴蝶蘭 Tropican Lady ACT 片段核酸序列,分別設計 5’及 3’ 端專一性引子,快速增殖 cDNA 端點 (RACE)。進行 End-to-end PCR,選殖蝴蝶蘭 Tropican Lady ACT 全長核酸序列。選殖得蝴蝶蘭 ACT 全長核酸序列 1625bp,包含 1134bp 的開放讀寫區域可轉譯為 377 個胺基酸序列。5’ UTR 長約 131∼186bp,3’ UTR長約 371bp。經 BLAST 比對分析,其胺基酸序列與蝴蝶蘭雜交種 True Lady 之 ACT1、ACT2 及 ACT3、阿拉伯芥 ACT1、ACT2、ACT3、ACT4、ACT2/7 及 ACT11、大豆 Sac4、玉米 Maz83 及水稻 RAc 的一致性高達 90% 以上。ACT 為單套以上拷貝,在蝴蝶蘭 Tropican Lady 葉片、全開花朵及不同時期花苞皆會表現。分析蝴蝶蘭 Tropican Lady 的 ACT 蛋白質結構,其分子量為41.72 kDa,等電點 (pI) 為 5.32,並具 ACT 所具備的 3 個 motifs,分別位於 55∼65 (YVGDEAQSSKRG) (ACTINS_ACT_LIKE motif)、106∼118 (LLTEAPLNPKANR) (ACTINS_1 motif) 及 358∼366 (WIAKEYDE) (ACTINS_2 motif)。
To study the expression and copy number of Phalaenopsis Tropican Lady ACTIN gene, an ACTIN cDNA was cloned from P. Tropican Lady flowers. Based on the P. Tropican Lady ACT cDNA-fragment nucleotide sequence, the 5’- and 3’- end gene specific primers were designed for rapid amplification of cDNA ends (RACE). End-to-end PCR with 5Ae/3Ae paired primers (located separately within the 5’UTR and 3’UTR) was performed to clone full-length ACT. The length of the cloned ACT cDNA was 1625bp, which contains 1134bp ORF encoding a polypeptide about 377 a.a. The 5’ UTR and 3’ UTR were about 131-186bp and 371bp, respectively. The deduced amino acid sequence of full-length ACT showed more than 90% identity to those of P. True Lady, Arabidopsis, soybean, maize and rice by BLAST analysis. ACT was expressed in flower buds, fully-opened flowers and leaves of P. Tropican Lady. More than one copy was detected in P. Tropican Lady genome. The calculated molecular mass of P. Tropican Lady ACT is 41.72 kDa with the isoelectric point 5.32. The predicted protein contains three typical ACT motifs, which located within 55-65 (YVGDEAQSSKRG) (ACTINS_ACT_LIKE motif), 106-118 (LLTEAPLNPKANR) (ACTINS_1 motif) and 358-366 (WIAKEYDE) (ACTINS_2 motif), respectively.
目錄
頁次
中文摘要 i
英文摘要 ii
誌謝 iii
目錄 iv
圖表索引 vi
壹、前言 1
貳、前人研究 2
一、Actin 的重要生物功能 2
二、ACTIN 基因族之表現及演化 8
三、細胞支架相關基因族之表現 9
四、蝴蝶蘭 ACTIN 之研究簡況 10
參、材料與方法 11
一、植物材料 11
二、試驗方法 11
1. 基因組 DNA 之抽取 11
2. 總量 RNA之抽取 12
3. ACTIN cDNA片段之選殖 13
4. 探針之製備 18
5. 南方雜合 19
6. 北方雜合 21
7. 快速擴增 ACTIN cDNA 端點 23
頁次
8. 選殖 cDNA 殖系之分析 26
肆、結果 35
一、蝴蝶蘭 Tropican Lady ACTIN 之選殖 35
二、快速擴增 ACTIN cDNA 端點及 ACTIN 全長之選
殖 37
三、蝴蝶蘭 Tropican Lady 與其他物種間ACTIN 胺基
酸序列之比較 39
四、蝴蝶蘭 Tropican Lady 與其它植物 ACTIN 特性之
比較 40
五、蝴蝶蘭 Tropican Lady 與數種植物 ACTIN 之演化
關係 41
伍、討論 58
一、蝴蝶蘭 Tropican Lady ACTIN 片段之選殖 58
二、快速擴增 ACTIN cDNA 端點及 ACTIN 全長之選
殖 60
三、蝴蝶蘭 Tropican Lady 與其他物種間ACTIN 胺基
酸序列之比較 61
四、蝴蝶蘭 Tropican Lady 與數種植物 ACTIN 之演化
關係 62
陸、參考文獻 63
圖表索引
頁次
圖 1、pGEM-T Easy vetor 圖譜 28
圖 2、蝴蝶蘭雜交種 Tropican Lady 開花株之不同發育時
期花苞 (fb1fb8) 及全開花朵 29
圖 3、圖解蝴蝶蘭 Tropican Lady ACTIN cDNA 及 ACTIN
專一性引子之相對位置 30
圖 4、利用 CLONTECH RACE 試劑組快速增殖 cDNA
端點流程圖 31
圖 5、5’ 端 RACE 的細節步驟 32
圖 6、3’ 端 RACE 的細節步驟 33
圖 7、以蝴蝶蘭 Tropican Lady 花朵 cDNA及專一性引子
Actin2 及 Actin3 進行聚合連鎖反應之增殖產物 42
圖 8、蝴蝶蘭雜交種 Tropican Lady ACTIN cDNA 片段之
核酸及轉譯胺基酸序列 43
圖 9、以 Aii 殖系當探針進行蝴蝶蘭雜交種 Tropican Lady
基因組 DNA 南方雜合分析 44
圖 10、北方雜合分析(20g總量RNA)蝴蝶蘭Tropican Lady
不同時期的花苞及不同器官之 ACTIN 基因表現 45
圖 11、以 5A 及 3A 引子分別自蝴蝶蘭 Tropican Lady mRNA
中快速擴增 ACTIN cDNA 5’ 及 3’ 端點 46
圖 12、蝴蝶蘭Tropican Lady ACTIN 殖系5A2、5A4及5A6與
雜交種 True Lady之ACTIN1基因的 5’UTR 序列排比 47
頁次
圖 13、以 3A2 專一性引子自蝴蝶蘭 Tropican Lady 花朵
mRNA 中,快速擴增 ACTIN cDNA 3’ 端點 48
圖 14、End-to-end PCR 49
圖 15、蝴蝶蘭雜交種 Tropican Lady 的ACTIN cDNA基因
全長核酸及轉譯胺基酸序列 50
圖 16、蝴蝶蘭 Tropican Lady (ACT) 與其他物種 ACTIN 胺
基酸之多序列排比 51
圖 17、不同物種間 ACTIN 胺基酸序列的歧異度 53
圖 18、蝴蝶蘭 Tropican Lady ACTIN 之親疏水性圖譜 54
圖 19、蝴蝶蘭 Tropican Lady 與多種植物的 ACTIN 親緣關
係圖 55
表 1、試驗使用之引子序列 34
表 2、殖系 Aii 的殖入片段 ACTIN 核酸與演譯胺基酸序
列與其他植物物種之比對 56
表 3、蝴蝶蘭 Tropican Lady ACTIN 核酸與演譯胺基酸全
長序列及其他物種之比對 57
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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