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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:廖惠雯
研究生(外文):Huiwen, Liao
論文名稱:誘導性細胞間素-3基因表現系統的建構
論文名稱(外文):Construction of Inducible IL-3 Gene Expression System
指導教授:葉世榮葉世榮引用關係江啟勳
學位類別:碩士
校院名稱:國立清華大學
系所名稱:生命科學系
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2002
畢業學年度:90
語文別:中文
論文頁數:68
中文關鍵詞:細胞間素-3誘導性基因表現系統
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免疫基因療法在癌症治療的應用上有很正面的潛力,本論文基於其中的優勢為建立一個具有良好調控特性的基因轉殖表現系統,將細胞間素-3(IL-3)轉殖進入腫瘤細胞並以藥物誘導表現,以期誘導表現的細胞間素-3能對腫瘤治療產生成效,並且降低其過量表現所造成的副作用。動物體外之實驗首先利用螢光蛋白質(EGFP)的誘導表現說明誘導性基因轉殖系統的功能完整。而後進行細胞間素-3的誘導表現系統建立,並於細胞間素-3之基因與蛋白質表現結果證實該系統的成功構築,再將此誘導性細胞間素-3基因轉殖腫瘤細胞注射入動物體內,建立腫瘤動物模式以觀察細胞間素-3之誘導表現與腫瘤治療的效果,但動物實驗結果發現新構築之腫瘤細胞,其腫瘤生成率極低,無法在動物中形成腫瘤,自然無法觀察比較其治療成效。檢測動物血清中細胞激素-3的含量以及動物脾臟腫大觀察也同樣沒有正面的結果說明細胞間素-3被誘導表現的證據。推測此轉殖系統的建構流程冗長不利於實驗中所使用之TRAMP腫瘤細胞,建議可改用其他腫瘤細胞與動物模式,或改以腺病毒轉染方式為媒介,簡化流程並得到較高的轉殖效率。
目錄
英文摘要.................................................Ⅰ
中文摘要.................................................Ⅱ
誌謝.....................................................Ⅲ
目錄.....................................................Ⅳ
第一章 緒論
1.1 腫瘤的免疫基因治療
1.1.1 癌症的傳統治療方式.........................1
1.1.2 癌症的基因治療.............................3
1.1.3 癌症的免疫基因治療.........................4
1.1.4 癌症免疫基因治療中常用的細胞激素及其作用機制..........................................5
1.2 轉殖基因的條件式調控
1.2.1 傳統轉殖基因系統的限制.....................6
1.2.2 調節性轉殖基因系統的需求...................7
1.2.3 條件式調控轉殖基因系統-Tet system的建立....8
1.3 細胞間素-3的功能及對腫瘤的影響
1.3.1 細胞間素-3的免疫與造血功能...............10
1.3.2 細胞間素-3於腫瘤基因治療的免疫功能.......11
1.4 研究目的與內容................................13
第二章 材料與方法
2.1 細胞株與細胞培養..............................14
2.2 質體的構築
2.2.1 勝任細胞的製備............................14
2.2.2 細菌熱休克轉化作用........................15
2.2.3 質體的製備................................15
2.2.4 限制酵素切割反應..........................16
2.2.5 DNA片段的電泳分離.........................16
2.2.6 DNA片段的純化.............................17
2.2.7 聚合酵素連鎖反應..........................17
2.2.8 DNA接合反應...............................18
2.2.9 Quick Screening............................19
2.3 誘導性調控基因在細胞中的表現
2.3.1 細胞的轉染作用............................20
2.3.2 誘導性調控基因轉殖細胞的建立..............20
2.3.3 細胞對抗生素藥物的敏感度測試..............21
2.3.4 細胞存活試驗..............................22
2.3.5 基因轉殖細胞的調控藥物處理...............22
2.3.6 螢光蛋白質的顯微鏡觀察...................23
2.3.7 細胞RNA的萃取...........................24
2.3.8 RT-PCR...................................24
2.3.9 酵素連結免疫吸附法.......................25
2.4 動物實驗
2.4.1 實驗動物.................................27
2.4.2 皮下注射.................................27
2.4.3 基因調控藥物處理.........................28
2.4.4 血清採樣.................................28
2.4.5 腫瘤切片組織.............................28
第三章 實驗結果
3.1 誘導性細胞間素-3基因轉殖腫瘤細胞的建立
3.1.1 構築細胞間素-3質體(pTRE2-IL3)........29
3.1.2 螢光蛋白質質體的序列確認................30
3.1.3 TRAMP細胞對抗生素藥物G418以及Hygromycin的敏感度測試..............................31
3.1.4 誘導性調控基因(Tet-On)轉殖細胞的建立..32
3.1.5 誘導性螢光蛋白質基因轉殖細胞的建立與表現......................................32
3.2 誘導性調控細胞間素-3基因在細胞層次中的表現
3.2.1 IL-3於細胞中的mRNA表現................33
3.2.2 IL-3於細胞中的蛋白質表現...............34
3.3 誘導性調控細胞間素-3腫瘤細胞(TT-IL3)在活體動物中的表現與影響
3.3.1 TT-IL3在動物體中的腫瘤生成.............35
3.3.2 IL-3蛋白質於動物血清中的檢測...........36
3.3.3 實驗動物的脾腫大觀察....................37
第四章 討論.............................................38
第五章 參考文獻.........................................44
第五章 參考文獻
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QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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