臺灣博碩士論文加值系統

本研究以毛細管電泳紫外光吸收法使用十二烷基硫酸鈉（Sodium dodecyl sulphate, SDS）為介面活性劑，來量測老鼠血中的皮質固酮（corticosterone），並利用毛細管掃集濃縮法（sweeping）來當作樣品線上濃縮技。最佳的線上濃縮和分離條件已經被探討。當使用光陣列二極體在波長247 nm為確認時，最低偵測極限為5 ng/mL （S/N=3）。在真實樣品的分析當中，皮質固酮可以分別從受壓力（stressed）與未受壓力（non-stressed）的老鼠血中測定的到。此方法所顯現之結果為，在未受壓力老鼠血中皮質固酮濃度僅有 ~ 52 ng/mL，在受壓力老鼠中則明顯的增加為 ~ 218 ng/mL。本方法可以發展成為檢驗動物體中，壓力指標物皮質固酮之濃度，也可以用於評估藥物治療對於減緩壓力之影響。

The separation and on-line concentration of corticosterone in mouse blood was achieved by means of capillary electrophoresis/UV absorbance using sodium dodecyl sulfate (SDS) as the surfactant. The procedure involved the use of an on-line sample concentration method by sweeping-micellar electrokinetic chromatography (sweeping-MEKC). The optimal on-line concentration and separation conditions were determined. The detection limit for this method was 5 ng/mL (S/N=3) and a photodiode array detection at 247 nm was used for identification. In an analysis of an actual sample, corticosterones from blood samples of a non- and stressed mouse were determined. The results show that only a minor amount of corticosterone (~ 52 ng/mL) was produced by a non-stressed mouse, whereas a significantly amount of corticosterone (~ 218 ng/mL) was present in a blood sample from a stressed mouse. The method developed here can be used to examine corticosterone levels as a marker of stress in test animals and may also be used for estimating the effect of stress-release medications.

目錄
Abstract i
中文摘要 ii
目錄 iii
圖目錄 v
表目錄 vi
第一章 序論
1-1 研究目的 1
1-2 荷爾蒙（Hormone）的簡介 3
1-2-1 荷爾蒙的功能與種類 3
1-2-2 固醇類荷爾蒙的生成 5
1-3 皮質固酮簡介 8
1-3-1 皮質固酮之功能 8
1-3-2 皮質固酮的生成 8
1-4 皮質固酮傳統的分析方法 10
1-4-1 放射性免疫法 10
1-4-2 層析法 12
1-5 本研究採用毛細管電泳掃集法的原因 13
第二章 原理及方法 15
2-1 毛細管電泳發展史 15
2-2 毛細管電泳分離的優點 16
2-3 毛細管電泳的分離原理 18
2-3-1 電泳分離與淌度 18
2-3-2 電滲流（EOF） 18
2-3-3 管柱分離效率與解析度 21
2-4 毛細管電泳基本分離模式 23
2-4-1毛細管區帶電泳法（CZE） 23
2-4-2 膠束電動層析法（MEKC） 24
2-5 毛細管電泳對於固酮類之分析方法簡介 28
2-6 毛細管電泳之線上濃縮技術簡介 29
2-7 毛細管電泳掃集法（Sweeping）之原理 31
第三章 儀器及藥品 34
3-1 毛細管電泳儀 34
3-2 毛細管的處理 36
3-2-1 新毛細管的活化 36
3-2-2 每日實驗毛細管的處理 36
3-2-3 實驗操作條件 36
3-3 儀器及其週邊設備 38
3-4 藥品及溶劑 39
3-5 老鼠之來源與血清樣品之處理 40
3-5-1 老鼠的取得 40
3-5-2 代謝性壓力實驗 40
3-5-3 血清樣品的處理 41
第四章 實驗結果與討論 42
4-1溶液之配製與真實樣品之前處理 42
4-1-1 標準品之配製 42
4-1-2 緩衝溶液（running buffer）之配製 42
4-1-3 樣品機質溶液之配製（sample matrix） 43
4-1-4 內標物之添加與血清樣品之前處理 43
4-1-5 活性碳處理之血清樣品 44
4-2 毛細管電泳掃集法（sweeping）最佳樣品堆積條件分析 47
4-2-1 介面活性劑濃度對標準品分離效果之影響 47
4-2-2 有機修飾劑甲醇對血清樣品分離之影響 47
4-2-3 進樣時間與理論板數之探討 50
4-3 標準品檢量線之製作 54
4-4 操作條件再現性之探討（RSD） 56
4-5 濃縮效果與偵測極限之探討 57
4-6 血清樣品之分析 60
4-6-1 真實樣品之定量方法 60
4-6-2 萃取回收率之探討 61
4-6-3 使用標準添加法量測老鼠血清中之皮質固酮 62
4-7 真實樣品之分析 65
4-7-1 對於受壓力與未受壓力老鼠血清之分析 65
4-7-2 接受不同壓力刺激後老鼠血清之分析 68
4-7-3 分析施打不同劑量2-DG老鼠血清之結果 71
第五章 結論 72
5-1 標準品方面結論 72
5-2 血清樣品方面結論 72
發表論文 74
參考文獻 75
附錄1. 毛細管電泳儀操作說明 76
附錄2. 毛細管電泳對無機陰陽離子之分離 77
附錄3. GC-MS與本方法定量之結果比較 78
圖目錄
第一章
圖 1-1 皮質固酮與氫基皮質酮 2
圖 1-2 生物體中固醇類賀爾蒙之合成途徑 4
圖 1-3 腎上腺皮質促素（ACTH）的作用機制 9
圖 1-4 放射性免疫法競爭性原理示意圖 11
第二章
圖 2-1 管柱內流動的示意圖及相對溶質的區帶 17
圖 2-2 毛細管電泳之基本組件圖 17
圖 2-3 毛細管壁因帶電荷而形成電雙層及zeta電位示意圖 19
圖 2-4 EOF的形成及流動示意圖 20
圖 2-5 層析圖譜之譜峰底寬及遷移時間之示意圖 22
圖 2-6 在CZE的分離模式下，不同粒子的遷移圖 24
圖 2-7 MEKC分離模式下，不同粒子的遷移 26
圖 2-8 掃集法sweeping 分離機制示意圖 33
第三章
圖 3-1 毛細管電泳儀氘燈光譜圖 35
第四章
圖 4-1 血清樣品萃取流程圖 45
圖 4-2 皮質固酮與內標之紫外光吸收光譜圖 46
圖 4-3 SDS濃度對層析結果之影響 48
圖 4-4 不同比例之甲醇對血清樣品層析結果之影響 49
圖 4-5 不同注射秒數之電泳層析圖 52
圖 4-6 注射秒數與譜峰面積與理論板數之關係 53
圖 4-7 皮質固酮與內標物之檢量線圖 55
圖 4-8 使用掃集法與未使用掃集法比較 58
圖 4-9 添加不同濃度之皮質固酮於未受壓老鼠血液中之電泳層析圖 63
圖 4-10 標準添加法之檢量線圖 64
圖 4-11 受壓力與未受壓力小白鼠之血清電泳層析圖 67
圖 4-12 接受不同壓力刺激後，老鼠之血清電泳層析圖 69
圖 4-13 接受不同壓力刺激後，老鼠血液中皮質固酮濃度變化圖 70
圖 4-14 施打不同濃度2-DG後，老鼠血液中皮質固酮濃度變化圖 71
表目錄
第一章
表 1-1 血清中各種類固醇類賀爾蒙之濃度 6
表 1-2 尿液中各種類固醇類賀爾蒙之濃度 7
表 1-3 利用各種方法量測血液中皮質固酮濃度之比較 13
第二章
表 2-1 毛細管電泳分離模式 27
表 2-2 各種毛細管電泳線上濃縮技術 30
第三章
表 3-1 毛細管每次分析之清洗程序 37
第四章
表 4-1 磷酸水溶液樣品之注射時間，長度與總體積關係表 50
表 4-2 毛細管電泳掃集法之再現性探討 56
表 4-3 使用掃集法與未使用掃集法之比較 59
表 4-4 皮質固酮之萃取回收率與準確度 61
表 4-5 未受壓力小白鼠與受壓力小白鼠同日與異日之定量結果 66

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