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研究生:葉志敏
研究生(外文):ChihMien Yeh
論文名稱:紫花酢醬草葉之光誘導磷酸化與去磷酸化蛋白質之研究
論文名稱(外文):Study on Photoinduced Phosphorylation and Dephosphorylation of Proteins in Leaves of Oxalis Corymbosa DC.
指導教授:何東英何東英引用關係
指導教授(外文):Ho Tong-Ing
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:化學研究所
學門:自然科學學門
學類:化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2002
畢業學年度:90
語文別:中文
論文頁數:50
中文關鍵詞:紫花酢醬草磷酸化去磷酸化
外文關鍵詞:Oxalis Corymbosa DC.phosphorylationdephosphorylation
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本論文主要是探討植物在傳遞光訊息時,蛋白質的磷酸化與去磷酸化反應所扮演的角色。本實驗是以酢醬草(Oxalis Corymbosa DC.)為研究目標,酢醬草在日間葉子會張開,而在夜間葉子則呈現緊閉的狀態。酢醬草如何在光的誘導下傳遞訊息給特定的蛋白質,而調控葉子的開合。由文獻中得知,許多植物藉由磷酸化與去磷酸化的絲氨酸、息寧氨酸或酪氨酸之蛋白質,將訊息傳遞出去。因此我們試圖比較酢醬草在日、夜間及葉子萃取液在照光下( in vitro ),是否因為光的誘發而進行磷酸化與去磷酸化的反應。
我們嘗試用三種抗磷酸化的抗體,找出在照光下會磷酸化與去磷酸化的蛋白質。(1) 使用抗磷酸化酪氨酸之單株抗體 (anti- phosphotyrosine ) 的西式點墨法 ( Western blotting ) 實驗中可明顯發現,單元分子量約為40 kDa的蛋白質,在365nm及450nm波長照光條件下30分鐘左右會進行去磷酸化的反應;單元分子量60 kDa蛋白質,則會在20~30分鐘有較明顯短暫磷酸化的現象。(2) 使用抗磷酸化絲氨酸之單株抗體 ( anti-phosphoserine ),在單元分子量約為40 kDa蛋白質會去磷酸化。(3) 使用抗磷酸化息寧氨酸之多株抗體 ( anti-phosphothreonine ), 在照光條件下並無明顯特殊改變;並嘗試以2D-SDS-PAGE找出此類蛋白質的PI,最後以逆相之高效液相層析儀 ( RP-HPLC-C4 column )、CM-fast gel之重力管柱層析、陰離子交換管柱( mono-Q ) 之快速蛋白質層析儀 ( FPLC ) 及in gel digestion,做進一步分離及蛋白質身份鑑定,並試圖討論此類蛋白質在UV-A及藍光系統下,磷酸化與去磷酸化可能發生的原因及其功能。

第一章 緒論.............................       1
第一節 葉綠體與光合作用....................           1
第二節 光合色素........................      2
第三節 高等植物的光受體....................     3
1. 植物的UV-B光源之光受體................       4
2. 植物的UV-A及藍光光源之光受體............ .        5
3. 植物的紅光及遠紅外光光源之光受體............ 8
4. 植物在UV-A及藍光系統下光受體的吸光團之光譜性質... .12
第四節          絲氨酸及息寧氨酸蛋白質之去磷酸酵素抑制劑之性質..... 14
第五節      研究工作與目的.................... .18
第二章 實驗部份.......................... 19
第一節 藥品與溶劑.......................     19
第二節 儀器裝置........................   21
第三節 實驗方法 ( 照光實驗 ) .................    23
1. 紫花酢醬草萃取液之製備及照光實驗............ 22
2. 加入去磷酸酵素抑制劑之照光實驗............. 22
第四節 實驗方法 ( 電泳分析 ) ................. 23
1. 蛋白質定量.......................23
2. 膠片製備........................24
2-1 膠體溶液之配方..................... 24
2-2 製作膠片........................ 25
2-3 電泳方法........................ 25
3. 二維電泳分析......................26
3-1 藥品配製........................ 26
3-2 實驗方法與步驟.....................  27
4. 蛋白質免疫轉印分析...................29
第五節 蛋白質純化....................... 31
1. 以C4逆向高效層析管柱純化分離............. 31
2. 以陰離子交換樹酯進行部份純化分離............ 32
3. 以陽離子交換樹酯進行部份純化分離............ 33
4. 蛋白質烷化反應.....................34
第六節 蛋白質身份鑑定..................... 36
1. 膠片之消化與分離....................36
2. 以C18逆向高效層析管柱純化分離分離peptide........37
第三章 實驗結果.......................... 38
第四章 實驗討論及未來展望..................... 44
參考文獻
附錄

參 考 文 獻
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