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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:蔡汶修
研究生(外文):WEN- HSIU TSAI
論文名稱:咸豐草組織培養與基因轉殖系統之探討
指導教授:廖麗貞廖麗貞引用關係
學位類別:碩士
校院名稱:國立高雄師範大學
系所名稱:生物科學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2003
畢業學年度:91
語文別:中文
論文頁數:37
中文關鍵詞:咸豐草組織培養基因轉殖
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大花咸豐草( Bidens pilosa L.var.radiata Sch) ,為一年生菊科鬼針草屬植物,為台灣數量龐大之野草。菊科植物的組織培養報告多以各種菊花為材料,本研究首次嘗試進行咸豐草組織培養,同時利用莖段與葉片作為培植體,探討在不同植物生長調節劑濃度組成之培養基的培養結果。
在癒合組織的誘導方面,在添加0.5 ppm NAA的1/2 MS培養基中,帶節莖段可得到最大的癒合組織。在添加1 ppm NAA與5 ppm Kinetin的1/2 MS培養基中,葉可得到最大的癒合組織,但莖段的效果優於葉片。癒合組織培養三週後,共有六種培養基可分化出新苗,其中,在添加0.5 ppm NAA與0.5 ppm Kinetin的1/2 MS培養基中可見到癒合組織分化成叢生小苗。
在根的誘導方面,無論是否添加Kinetin,添加0.5 ppm或1 ppm NAA的1/2 MS培養基中,莖段的發根良好;而在添加1 ppm或5 ppm NAA的1/2 MS培養基中,葉片可長出茂盛的根系。莖段培養時,可觀察到側芽的誘導生長,計有13種培養基中有生長反應。在添加1 ppm Kinetin的1/2MS培養基中,可得到叢生狀側芽。
我們利用農桿菌基因轉殖來建立基因轉殖系統,培植體選擇莖段和葉片,並用EHA105進行感染。得到最佳轉殖條件如下:感染時間30分鐘,共同培植時間不可超過48小時。當農桿菌生長太快速時,可採用1﹪次氯酸鈉溶液殺菌。抑菌劑使用500 ppm Timentin和500 ppm Cefotaxime的濃度組合,效果較佳。
農桿菌ABRC3-CBF1質體的轉殖初步篩檢,我們利用螢光顯微鏡檢測綠螢光蛋白的表現,而培植體仍繼續培養當中。未來待轉殖植物生長後可利用GUS或南方墨點法作進一步篩檢。
Abstract
Bidens pilosa( Bidens pilosa L.var.radiata Sch)is an annual
herb of Compositae Bidens . It is also a kind of very numerous weed in Taiwan .Most of the studies about tissue culture of Compositae are using Chrysanthemum as explant. This is the first study to use Bidens pilosa as material in Compositae tissue culture. This study tried to induce callus
formation or growth response from stem or leaf tissue by different plant growth regulators(PGRs)com binationin in medium.
The callus formation from stem showed best efficiency in 1/2 MS medium supplemented with 0.5 ppm NAA ,whilist the callus formation from leaf showed best efficiency in 1/2 MS medium supplemented with 1 ppm NAA and 5 ppm Kinetin. However, the callus formation from stems showed better than that of leaves.Three weeks after callus firmation, we can see shooting from callus in six kinds of mediums. A well branched plantlet will be observed in 1/2 MS medium supplemented with 0.5 ppm NAA and 0.5 ppm Kinetin.
The root induction from stem showed best efficiency in 1/2 MS medium supplemented with 0.5 ppm or 1 ppm NAA, whilist the root induction from leaf showed best efficiency in 1/2 MS medium supplemented with 1 ppm NAA and 5 ppm NAA, whether supplying Kinetin or not. We can see lateral bud formation from stem in 13 kinds of PGRs combinations . The lateral buds growed with many branches in 1/2 MS medium supplemented with 1 ppm Kinetin.
We use Agrobacterium-mediated transformation to establish the gene transfer system. Stems and leaf pieces were chosen for explants of transformation, and EHA105 was used to explants. The best transformation condition was discussed as follows. Infection time was 30 min and co-culture time can not be more than 2 days. If the Agrobacterium grow too fast, 1﹪Sodium hypochloride solution was used for bactericide. The combination of 500 ppm Timentin and 500 ppm Cefotaxime showed better effect in inhibiting.
The transformation of ABRC3-CBF1 plasmid were detected by the repression of green fluorescence protein(GFP) basically .The plantlet tissue is still culturing now. The transgenic plant will be selected in the future by the detection of the reporter gene GUS and Southern hybridization.
中文摘要…………………………………………..……………………Ⅰ
英文摘要……………………………………………………….………Ⅱ
目錄…………………………………………………………………….Ⅳ
圖表目錄……………………………………………………………….Ⅴ
壹、 前言…………………………………………………………………1
貳、 前人研究……………………………………………………………2
一、 大花咸豐草簡介………………………………………………2
二、 植物組織培養…………………………………………………2
三、 農桿菌轉殖系統………………………………………………3
參、材料與方法…………………………………………………………7
一、植物組織培養…………………………………………………7
二、植物基因轉殖…………………………………………………8
肆、結果………………………………………………………………...17
一、 植物組織培養………………………………………………..17
二、 植物基因轉殖………………………………………………..19
伍、討論…………………………………………………………………32
一、植物組織培養……………………………………………….. 32
二、植物基因轉殖…………………………………………………33
陸、參考文獻……………………………………………………………35
陸、參考文獻
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