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研究生:王必顗
研究生(外文):Pi-Yi Wang
論文名稱:合成多氮聚丙烯醯胺化合物及製作非移動性酸鹼梯度膠片對蛋白質分離之研究
論文名稱(外文):Synthesis of polyazaacrylamide derivates and preperation IPG gel for proteomics
指導教授:鄭建中鄭建中引用關係
指導教授(外文):Chien-Chung Cheng
學位類別:碩士
校院名稱:淡江大學
系所名稱:化學學系
學門:自然科學學門
學類:化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2003
畢業學年度:91
語文別:中文
論文頁數:83
中文關鍵詞:固定式酸鹼梯度膠等電聚焦電泳多氮聚合物丙烯醯胺
外文關鍵詞:IPG gelIEFPolyazaAcrylamide
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本篇論文主要研發在蛋白質體學中新型的一維電泳材質,來改善蛋白質的分離。改善蛋白質分離的方法是利用親水﹑疏水﹑帶正電或負電等性質,製造與其有不同親和力的化合物以及添加具特殊結構的化合物,產生不同的穿過速率達到分離的效果。測試方式是先合成吡啶衍生物單體(monomer),再利用嵌入(doping)的方式將化合物製作成改良型的一維膠片。從一維膠片得到條狀膠片(strip)後與蛋白質做等電聚焦(IEF)分離測試,接著轉換至二維凝膠電泳進行分子大小的分離,經染色後由圖形來判斷蛋白質的分離效果。經由製作不同性質化合物﹑不同溶劑的膠片,及不同染色方法﹑不同蛋白質的用量,發現一維膠片解析度的好壞與二維膠片所得的最後結果,為一正比且直接的關係。因此,由二維電泳實驗的結果顯示改良後的膠片具有較好的分離效果,添加吡啶化合物所製成pH4-7的梯度膠片在靠近酸端對蛋白質有較好的篩選性。不同溶劑亦會對分離效果產生影響,因為膠片導電性的改變,而以高介電常數且與水互溶的溶劑為佳。
The goal of this reasearch is to develop and improve a novel material for protein seperation in one-dimension electrophoresis(1-DE). Based on amino acids are the mainly component in it, hence, proteins could be hydrophobic or hydrophilic, bearing positive or negative charge. So it can be seperated by compound side chain of amino acid interaction or by specific compound-compound pore structure. According to satisfy the previous conditions and there are ready-made pyridine derivates and macrocyclic amine compounds in our laboratory. Synthesis these compounds with acryloyl chloride to get target monomer then insert into 1-D gel from dopingprinciple. After testing the monomers with different solvents then make up to immobiline pH gradient(IPG) gel, running isoelectric electrophoresis focusing(IEF) and 2-D. We can analyze the resolution and reproduction from 2-D result to identify 1-D seperation ability. The experiment data from 2-D have showed. The 7cm pH4-7 IPG strip with modify compound have better selectivity near the acid end. The branch length of pyridine derivates will also affect seperation efficiency, short length will be better. To improve the sensitivity of protein in IPG gel, silver stain is a good choice.
中文摘要……………………………………………………………………I
英文摘要…………………………………………………………………...II
目錄………………………………………………………………………..III
前言………………………………………………………………………….1
第一章、簡介……………………………………………………….3
1-1、等電聚焦(IsoElectric Fousing, IEF)發展的歷史………………….3
1-2、蛋白質定量之種類與原理……………………………………………5
1-3、化合物設計的依據……………………………………………………7
1-4、等電聚焦(IsoElectic Focusing)的原理………………………………..8
1-5、固定式酸鹼梯度膠(Immobilize pH Gradient Gel)的原理………..9
1-6、SDS-PAGE(SDS-polyacrylamide Gel)的原理…………………….9
1-7、預備合成之化合物…………………………………………………...11
第二章、實驗部分………………………………………………….12
2-1、藥品…………………………………………………………………...12
2-2、儀器設備……………………………………………………………...15
2-3、合成目標分子………………………………………………………..17
2-4、膠體溶液配製………………………………………………………..19
2-5、蛋白質取得的方法…………………………………………………..20
2-6、固定式酸鹼梯度膠片製作方法……………………………………..22
2-7、SDS-PAGE gel製作方法…………………………………………….25
第三章、實驗結果與討論…………………………………………..29
3-1、合成方面……………………………………………………………..29
3-2、蛋白質定量…………………………………………………………..34
3-3、1-D與2-D測試……………………………………………………...35
3-4、IEF分離效果的算法………………………………………………...40
第四章、結論……………………………………………………………...41
表1、IPG酸鹼溶液對照表………………………………………………...76
表2、SDS-PAGE膠體溶液配方表………………………………………...77
表3、SDS平衡緩衝溶液配方表…………………………………………..78
表4、stacking gel配方表…………………………………………………..79
表5、銀染色配方流程表…………………………………………………..80
表6、合成條件比較表……………………………………………………..81
表7、化合物對溶劑測試表………………………………………………..82
表8、不同濃度丙烯醯-二-甲基胺吡啶溶於DMF配製表……………….83
參考文獻
光譜圖表
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